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《湖北中医学院》 2005年
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中药多糖在信号转导通路中抗肿瘤作用及其机理研究

罗利琼  
【摘要】:目的: 中医中药抗肿瘤机制研究在cAMP-PKA通路、磷脂酰肌醇通路、钙和钙调蛋白通路等方面取得新进展。实验组从磷脂酰肌醇专一性磷脂酶C—三磷酸肌醇/钙离子、二酰基甘油/蛋白激酶C的跨膜信号转导通路着手,来研究中药多糖在信号转导通路中抗肿瘤作用。实验组选择钙离子、蛋白激酶C和细胞凋亡效应三个作用关键点,运用现代免疫学、分子生物学、生物化学等方法探讨我国传统中药抗肿瘤的作用机制。在细胞分子水平,研究信号转导系统中钙离子、蛋白激酶C和细胞凋亡效应三个关键点作用及相互间联系,并对中药具有的多靶点效应进行全新的认识,并进一步探讨其抗肿瘤的作用机制。方法: 通过建立动物肿瘤模型,分别用不同剂量的三种中药多糖进行实验治疗。药物治疗结束后24小时,完整剥出瘤体,称重,计算抑瘤率。并切取标本,固定,包埋,切片,结合免疫组化法检测瘤体pkc表达的变化。并进行细胞培养实验,分别用不同剂量的三种中药多糖作用于鼠肉瘤S-180细胞,自动酶标仪检测其MTT;经PI染色后,通过流式细胞仪,检测细胞凋亡率;Fura-2/AM负载后,经荧光分光光度计测定荧光强度,检测细胞内钙离子浓度的变化。探讨三种中药多糖在信号转导通路中抗肿瘤作用及其机制。 结果: 通过体内外实验,我们得出三种中药多糖抑瘤率与生理盐水组都有显著性差异(P0.05)。在蛋白激酶C的免疫组化实验中,我们发现仅猪苓多糖能明显上调蛋白激酶C的表达,与生理盐水组、茯苓多糖组、黄芪多糖组有显著性差异(P0.05)。在细胞内钙离子浓度变化实验中,三种中药多糖作用于鼠S-180肉瘤细胞1小时后,细胞内钙离子的浓度明显升高,与生理盐水组比较有显著性差异(P0.05)。猪苓多糖组与黄芪多糖组两种中药多糖组内没有差异性(P0.05)。三种中药多糖作用于鼠S-180肉瘤细胞8小时后,三种中药多糖各组细胞内钙离子浓度升高不明显,与生理盐水组比较有显著性差异(P0.05)。三种中药组内没有显著性差异。(P0.05)。猪苓多糖对细胞内钙离子浓度的影响与其作用时间和剂量有一定的相关性,茯苓多糖对细胞内钙离子浓度的影响与其剂量有一定的相关性,黄芪多糖对细胞内钙离子浓度的影响与其作用时间和剂量没有一定的相关性。在细胞凋亡实验,我们发现作用于鼠S-180肉瘤细胞1小时后,黄芪多糖组和茯苓多糖中剂量组的细胞凋亡率明显升高,与生理盐水组比较有显著性差异(P0.05);作用于鼠S-180肉瘤细胞8小时后,三种中药多糖细胞凋亡率显著性 升高,一与生理盐水组有差异性(P0.05),黄茂多糖高剂量组和低剂量组间有显 著性差异(PO.05)。从实验结果我们可得推出三种中药多糖影响细胞增殖,可能 也通过提高细胞内钙离子浓度来诱导细胞凋亡,所需要时间的长短不一,猪答多 糖组可能因蛋白激酶C表达的影响,过程复杂,途径存在其他分支,细胞内钙离 子浓度的升高诱导细胞凋亡滞后。 结论: 从实验结果我们可推出中药多糖上调蛋白激酶C的表达、升高细胞内 [Ca门i、诱导肿瘤细胞凋亡,三者间存在着一定的联系。细胞信号转导系统是一 个庞大、复杂而精确的网络系统,各条信号转导通路并不是独立存在;信号传递 的调节也是复杂的,精细的。中药多糖可能同时活化几条信号通路,引发多种生 物效应来抗肿瘤。这也可能正是中药多糖具有的多靶点效应在细胞分子水平体 现。中药多糖对这三个作用关键点在磷脂酞肌醇专一性磷脂酶C一三磷酸肌醇/ 钙离子、二酞基甘油/蛋白激酶C的跨膜信号转导通路上,更详细具体作用和三 者相互间的联系,需要进一步研究。 关键词:中药多糖;信号转导通路;钙离子;蛋白激酶C;细胞凋一亡;
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R285

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