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《湖北中医学院》 2005年
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用血清药理学方法观察眼血散复方对成纤维细胞的影响

袁昌亮  
【摘要】:目的: 本实验运用血清药理学方法,体外观察3种浓度中药复方眼血散煎剂浓缩液及含药血清对NIH/3T3细胞增殖与凋亡的影响,并与空白对照组及空白血清对照组比较,来探讨以“祛瘀化痰”法组方的眼血散防治增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的作用机理,从细胞学水平验证祛瘀化痰法的疗效,为防治PVR的临床用药及开发提供科学依据和方法论指导。 方法: 1.细胞培养:应用体外细胞培养技术,进行NIH/3T3细胞(小鼠胚胎成纤维细胞)培养。 2.药液制备:眼血散复方经水煮醇沉,浓缩至2g/ml,过滤,灭菌,0℃保存备用。 3.血清制备:按照血清药理学方法,分别给正常兔连续灌服眼血散煎剂浓缩液和生理盐水3天,制备眼血散含药血清及空白血清。 4.分组:取对数生长期的NIH/3T3细胞,分为10组:含药血清20%、10%、5%浓度组,空白血清20%、10%、5%浓度组,眼血散煎剂浓缩液25mg/ml、12.5mg/ml、6.25mg/ml浓度组,空白对照组。 5.检测:分别以MTT比色法,羟脯氨酸比色法,Hoechst33258荧光染色法,流式细胞术观察3种浓度眼血散煎剂浓缩液及含药血清对NIH/3T3细胞生长,胶原合成,细胞形态,细胞周期和细胞凋亡的影响。 结果: 1.抑制成纤维细胞增殖:眼血散煎剂浓缩液及含药血清对NIH/3T3细胞均有生长抑制作用,3种浓度眼血散煎剂浓缩液分别与空白对照组比较均有显著性差异(P0.01),20%及10%含药血清分别与空白对照组及空白血清对照组比较均有显著性差异(P0.01),且效应具有剂量依赖关系。5%含药血清无显著性差异(P0.05)。空白血清对细胞增殖无明显影响(P0.05)。 2.抑制细胞胶原蛋白合成:眼血散煎剂浓缩液及含药血清使NIH/3T3细胞培养上清液中羟脯氨酸含量降低,提示胶原蛋白合成减少,3种浓度眼血散煎剂浓缩液分别与空白对照组比较均有显著性差异,20%及10%含药血清分别与空白对照组及空白血清对照组比较均有显著性差异(P0.01),且效应具有剂量依赖关系。5%含药血清无显著性差异(P0.05)。空白血清对细胞胶原合成无明显影响(P0.05)。 3.细胞周期阻滞作用:眼血散煎剂浓缩液及含药血清均有细胞周期阻滞作用,使细胞生长停滞在G_0/G_1期,阻止细胞DNA合成及有丝分裂,使S及G_2/M期细胞减少,从而抑制细胞生长。3种浓度煎剂浓缩液分别与空白对照组比较均有显著性差异,20%、10%含药血清分别与空白对照组及相应空白血清对照组比较均有显著性差异(P0.01)。5%含药血清无显著性差异(P0.05)。随着煎剂浓缩液及含药血清浓度的增大,停滞在G_0/G_1期的细胞数增多(P0.01),效应具有剂量依赖关系。空白血清对 湖北中医学院 眼科硕士研究生学位论文 细胞周期无明显影响(P0.05)o 4.促进细胞凋亡:Hoechs t 33258染色荧光显微镜下可见凋亡细胞、凋亡 继发性坏死细胞所占细胞百分比增多,细胞变圆,排列紊乱,稀疏,体 积缩小,胞核皱缩,同时伴有染色质凝聚及核碎片的形态学特征。3种 浓度的眼血散煎剂浓缩液分别与空白对照组比较均有显著性差异(P 0.01)。20%及10%含药血清分别与空白对照组、相应空白血清对照组比 较均有显著性差异(P0.01,P0.05)。5%含药血清无显著性差异(P 0.05)。随着煎剂浓缩液及含药血清浓度的增大,细胞凋亡率明显升 高(P0.01),效应具有剂量依赖关系。空白血清对细胞凋亡无明显影 响(P0 .05)。 结论: 眼血散能抑制NIH/3T3成纤维细胞增殖及其胶原合成,并通过细胞周期阻 滞作用,使细胞生长停滞,促进细胞凋亡,从而达到防治增殖性玻璃体视网膜病 变的作用。 主题词: 血清药理学 抗增殖 NIH/3T3细胞 秘眼血散
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R285

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