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《湖北中医学院》 2006年
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从细胞周期调控探讨益气活血方防治球囊损伤血管狭窄的机理

程伟  
【摘要】:研究背景:冠心病是严重威害中老年人健康的一种常见、多发心血管疾病。在冠心病治疗中,冠状动脉介入治疗已具有越来越重要地位。由于介入治疗术后部分患者出现原先扩张的冠状动脉再狭窄,常需要再行PTCA或CABG,给患者带来巨大经济和心理负担。针对RS防治措施,一直是国内外医学界长期探索的热点。随着支架置入术、血管内照射、药物涂层支架置入术等新技术先后广泛应用,逐渐显示出解决其难题的良好前景,但仍然不能完全解决所有支架内再狭窄,另外费用昂贵、远期疗效、安全性等诸多问题,还有待大规模临床试验证实。 在此背景下,应用祖国医学理论,探索防治RS这种新的医源性疾病同样受人关注。以中医理论为指导,我们认为RS患者具有“胸痹心痛病”及“导管外源机械挫伤”耗气伤血的双重特点,起病及病理演变“气虚血瘀”贯穿始终,从而推论“益气活血”治则应在防治该病中占有重要地位。在此基础上,优化选择具有抑制VSMCs增殖、减缓动脉内皮脱落后血管内膜增生等多种防治心血管疾病药效作用的“益气活血”中药,组成小复方制剂--益气活血方。 研究目的:其一寻求RS防治的有效中药,力求通过血管VSMCs周期调控分子,解释其抑制细胞增殖的药效机制;其二通过比较单纯活血、单纯益气及益气活血三种中医治则指导组方干预损伤血管狭窄,为中医防治RS理论提供实验依据。 研究方法: 益气活血方的由黄芪25g、川芎15g、三七5g配伍组成,经煎煮等工艺,制成0.45g/ml(每100ml溶液含生药45g,益气活血方小剂量组)、0.9g/ml(每100ml溶液含生药90g,益气活血方大剂量组)浓度的汤药;黄芪组由益气活血方大剂量组去川芎、三七而成,浓缩制成0.5g/ml(每100ml溶液含生药50g);缺黄芪组组(或称益气活血方缺黄芪),由益气活血方大剂量组去黄芪而成,制成0.4g/ml(每100ml溶液含生药40g)。 清洁级雄性SD大鼠72只,体重350-450g;适应性饲养一周。根据随机数字表法将动物随机分成对照组(手术对照组)、模型组、黄芪组、缺黄芪组、益气活血方小剂量组和益气活血汤大剂量组共6组,用Fogarty 2F球囊导管,实施股动脉插入球囊导管损伤颈总动脉大鼠,手术前一天开始依动物体重,益气活血方大剂量组以3.6275g/kg每日灌胃一次,其他中药组给予相应剂量药物,对照组、模型组给予生理药水,连续治疗5天和28天后处死动物取材、切片。 实验内容 1.观察各组第28天损伤血管苏木素-伊红(HE)和TR-A02弹力纤维染色组织病理变化,评价球囊损伤大鼠颈总动脉狭窄模型的建立及益气活血方对损伤血管内膜增殖的影响;2.用免疫组织化学的方法,检测损伤第5天各组血管壁PCNA的表达;3.用免疫组化的方法,检测第5天各组损伤血管壁三种重要的细胞周期蛋白cyclin A、D1和E的表达;4.用免疫组化的方法,检测第5天各组损伤血管壁两种重要的细胞细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2和CDK4的表达;5.用免疫组化的方法,检测第5天各组损伤血管壁三种重要的细胞细胞周期蛋白依赖激酶抑制蛋白P16、P21和P27的表达;6.用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,检测第5天损伤血管壁p21~(waf1) mRNA
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R285

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【共引文献】
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