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湖北省卷柏属药用植物的鉴定和品质研究

万定荣  
【摘要】: 卷柏属(Selaginella)为卷柏科的单一属,全球约有700种,中国有60~70种,其中22种有药用记载,湖北省的药用种类达14种,均以全草入药。本属植物普遍含有穗花杉双黄酮等多种双黄酮类抗肿瘤活性成分,文献报道有的还含生物碱类等活性成分。现代药理研究表明具抗肿瘤、抗菌、抗病毒、止血、免疫调节等多种药理作用。有的品种已载入国家或多个地方药材标准。鉴于湖北省产药用种类较多,原植物及药材鉴定困难,大多数种类缺乏品质鉴定分析方法,为此,对10种鄂产种类进行了系统的基源、性状和显微特征、薄层色谱、红外与近红外光谱、HPLC指纹图谱及含量测定、随机扩增多态DNA(RAPD)等方面的研究,探讨了相互间亲缘关系,从而指导临床应用及质量控制与分析。 通过实地调查与研究,发现湖北产卷柏属植物共有15种,药用14种(文献记载共有13种,药用10种);确定异穗卷柏为湖北地理分布新记录种(已有本种的记载属标本误定);根据植株形态、茎的解剖、红外光谱、HPLC指纹图谱的差异,提出将薄叶卷柏的变异类型作变种处理。 通过性状、显微、薄层色谱、红外光谱及HPLC指纹图谱等的研究表明,各个种既有共性,又有特征,可利用各层次的特征进行种间鉴别与种类鉴定。在显微观察上,10个种皆有厚壁组织(个别种例外)、气室、横桥、中柱鞘等共性,但厚壁细胞列数、气室数目与形态大小、构成横桥的薄壁细胞数目与列数在种间互有差异,可以区分。10种药材的薄层色谱皆有穗花杉双黄酮斑点,但各个种其他斑点的数目、位置、大小或颜色深浅互有差异。10个种的红外光谱FTIR一般具有下列11个共有吸收峰(cm~(-1))∶3418±4,2927±3,1740,1648±2,1513±2,1428.5±0.5,1383.5±0.5,1242,1156,1046±3,670,但各个种可依其整体峰形、吸收峰数目与位置(cm~(-1))、峰的强度,尤其是指纹区(1250~400cm~(-1))的特征加以鉴别。以穗花杉双黄酮作为参照物峰,研究并确定了10个种的HPLC指纹图谱,结果10个种均有相对保留时间(a值)分别为0.118、0.166、1、1.052等4个共有峰,但各个种又均有其他特征峰,或者全部峰的组合上具有特征性。各个种的HPLC指纹图谱既可用于鉴定又可用于品质分析,但因研究的样品份数过少,所获指纹图谱只能作为指纹图谱标准制定时的参考。此外,8个种的DNA扩增(RAPD)结果也显示出种间的差异。 用HPLC法测定了湖北省及其邻省所产10种13份卷柏属植物药样品的穗花杉双黄酮成分的含量,结果垫状卷柏、卷柏、疏叶卷柏、中华卷柏、伏地卷柏、江南卷柏中该成分含量均高于1.0%,而薄叶卷柏、翠云草、细叶卷柏、异穗卷柏含量略低或较低。同一地点(宜昌雾渡河)和同一时期(8月)采集的不同生境的翠云草样品,干燥向阳环境者含量为2.0mg/g,而阴湿环境者的含量低得多,说明生境是影响植物类药材质量的又一关键因素。 运用解剖、红外与近红外光谱、薄层色谱、HPLC指纹图谱以及DNA扩增图谱的相似程度,尤其是利用近红外光谱的聚类分析、RAPD分析聚类图以及HPLC指纹图谱的峰重叠率,可较准确判断本属药用植物间的亲缘关系。上述不同技术方法所获研究结果几乎都表明:卷柏与垫状卷柏亲缘关系密切;细叶卷柏、异穗卷柏以及伏地卷柏之间的关系也十分相近。这些判断与传统的形态学分类结果是一致的。此外,薄层色谱、HPLC指纹图谱和近红外一阶导数光谱聚类分析结果还表明,薄叶卷柏与江南卷柏的亲缘关系也较近。上述对亲缘关系的推断支持将垫状卷柏与卷柏作为同一种中药(卷柏)使用;支持民间将薄叶卷柏与江南卷柏同等入药的使用习惯。 研究还表明,形态学上难以解决的某些种下分类鉴定问题,可分别借助解剖、薄层、近红外光谱、HPLC指纹图谱等技术加以综合判断而解决。 上述研究为卷柏属药用植物的分类鉴定、药材的品质分析,以及资源的合理应用提供了系统性的技术方法与理论基础。


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