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《湖北中医学院》 2007年
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水陆二仙丹治疗肾病综合征大鼠蛋白尿的作用机理研究

金劲松  
【摘要】: 目的: 本实验研究以祖国医学及现代医学理论为基础,从血液生化学、组织病理学、分子生物学等方面探讨水陆二仙丹水提取液对阿霉素大鼠蛋白尿的影响及部分作用机制。 方法: 将Wistar雄性大鼠50只,随机分为正常组(n=10)、模型组(n=10)、水陆二仙丹高剂量组(n=10)、水陆二仙丹低剂量组(n=10)、苯那普利组(n=10)。采用阿霉素一次性尾静脉注射法(0.6mg/100g)制作肾病综合征模型。用药剂量及方法:正常组和模型组:0.9%生理盐水1ml/100g体重灌胃;高剂量组:高剂量水陆二仙丹水提取液1ml/100g体重灌胃;低剂量组:低剂量水陆二仙丹水提取液1ml/100g体重灌胃;苯那普利组:苯那普利0.3mg/100g体重灌胃,上述用药均为造模一周后开始,每日一次,疗程3周。①观察一般情况及体重,造模前、造模后第7天、给药第7、14、21天将大鼠置于代谢笼中收集其24小时尿液,测24HUPQ;给药第21天测尿β2-MG、ALB和IgG;②末次治疗给药后24h,摘除眼球法取血检测Scr、Bun、ALB、TP、TG和TCH;放射免疫法检测TNF—α、HA;流式细胞术检测外周血细胞CD_(44)阳性细胞数。③末次给药24小时后,迅速处死大鼠摘除左肾,分别称取50mg肾组织,RT-PCR法检测大鼠肾组织CD_(44)mRNA的表达。④末次给药24小时后,将摘除肾组织经处理后作超薄切片,在H-600透射电镜下观察;其余部分肾组织,处理后经HE及PAS染色,光镜下观察。⑤统计学方法:全部数据采用SPSS12.0统计软件进行分析,实验数据以均数±标准差(Mean±SD)表示,计量资料比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD法;两变量间相关关系采用双变量相关分析(Spearman相关系数)。 结果: 盐酸阿霉素尾静脉注射后7天,造模各组大鼠24HUPQ较正常组显著增加,24HUPQ均>50mg,说明肾病综合征模型制作成功。 ①水陆二仙丹水提取液对阿霉素肾病大鼠血液生化学及尿蛋白影响的研究:给药后第7天、给药后第14天、给药后第21天,高、低剂量组、苯那普利组24HUPQ均显著低于模型组(P<0.01);高、低剂量组、苯那普利组尿ALB、尿β_2-MG和尿IgG定量均显著低于模型组(P<0.01)。 给药三周后高、低剂量组、苯那普利组大鼠血清ALB、TP检测均显著高于模型组(P<0.01);高、低剂量组大鼠血清ALB、TP检测水平高于苯那普利组(P<0.05低剂量组P<0.01)。血脂结果显示:高、低剂量组、苯那普利组TG、CHOL含量显著低于模型组(P<0.01);高、低剂量组TG、CHOL水平均明显低于苯那普利组(P<0.01)(高剂量组CHOL P<0.05)。各组间BUN、Scr水平比较无显著性差异(P>0.05)。 说明水陆二仙丹能有效减少阿霉素肾病大鼠蛋白尿,并在改善阿霉素肾病大鼠营养状况、调节蛋白质代谢及脂质代谢方面有良好作用。 ②水陆二仙丹对阿霉素肾病大鼠TNF-α、HA影响的研究:高、低剂量组、苯那普利组TNF—α和HA均显著低于模型组(P<0.01);高、低剂量组、苯那普利组各组间TNF—α和HA无显著性差异(P>0.05);TNF—α、HA值与24HUPQ、尿ALB、尿β_2-MG和尿IgG呈正相关(P<0.01),提示水陆二仙丹通过影响细胞因子调节网络、减轻炎症反应减少尿蛋白的可能机制。 ③水陆二仙丹对阿霉素肾病大鼠外周血CD_(44)阳性细胞数影响的研究:高、低剂量组、苯那普利组大鼠外周血CD_(44)阳性细胞数显著低于模型组(P<0.01);高剂量组、低剂量组外周血CD_(44)阳性细胞数均低于苯那普利组(P<0.05);大鼠外周血CD_(44)阳性细胞数与24HUPQ、尿ALB、尿β_2-MG和尿IgG呈正相关(P<0.01),提示水陆二仙丹有降低阿霉素肾病大鼠外周血CD_(44)阳性细胞数,减轻炎症性损害的发生,从而减少尿蛋白的作用。 ④水陆二仙丹对阿霉素肾病大鼠肾组织CD_(44)mRNA表达影响的研究:高、低剂量组、苯那普利组各组大鼠肾组织CD_(44)mRNA表达显著低于模型组(P<0.01);高、低剂量组、苯那普利组各组间大鼠肾组织CD_(44)mRNA表达无显著性差异(P>0.05);CD_(44)mRNA在肾组织的表达与24HUPQ、尿ALB、尿β_2-MG和尿IgG呈正相关(P<0.01),在基因水平上说明了水陆二仙丹减少阿霉素肾病大鼠蛋白尿、阻缓肾脏炎性损伤的可能机制。 ⑤水陆二仙丹对阿霉素肾病大鼠的病理学研究:光镜下观察,模型组可见轻度系膜增生,其它各组肾小球及肾小管光镜下均未见明显病理改变;透射电镜检测结果,提示阿霉素肾病大鼠的病理变化主要在肾小球足细胞足突广泛融合,局部系膜细胞、基质增生及肾小管细胞周边水肿等,尚可见内皮细胞凋亡;水陆二仙丹高剂量组,低剂量组,苯那普利组大鼠病变程度明显较模型组轻,仅见足突部分融合。 结论: 1.本研究证明水陆二仙丹能有效降低阿霉素肾病大鼠蛋白尿,且在改善阿霉素肾病大鼠营养状况、调节蛋白质代谢及脂质代谢方面的良好作用。 2.水陆二仙丹治疗后大鼠病理改变明显减轻,为水陆二仙丹治疗阿霉素肾病大鼠、减轻蛋白尿提供了组织病理学上的依据。 3.水陆二仙丹降低阿霉素肾病大鼠蛋白尿的机理:水陆二仙丹可降低阿霉素肾病大鼠血TNF-α、HA和外周血CD_(44)阳性细胞数,通过对功能性细胞因子—细胞粘附分子—细胞间基质成分之间这一网络的作用,影响机体致炎及免疫功能,减轻炎症性损害的发生,从而起到减少尿蛋白的作用。同时,通过减轻炎症反应、阻止细胞的激活,阻断干扰CD_(44)的表达以及CD_(44)与配体的反应,减少阿霉素肾病大鼠肾组织CD_(44)mRNA的表达,从而阻缓肾脏的损伤。
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

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