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《湖北中医学院》 2007年
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化纤汤对博莱霉素致大鼠肺纤维化干预作用的实验研究

许朝霞  
【摘要】: 目的:肺间质纤维化是以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为主要特征的疾病。目前其发病机制尚未完全阐明,又无确切有效的药物治疗。探讨中医药对肺纤维化的防治具有广阔的前景和深远的意义。本课题采用大鼠一次性气管内滴注博莱霉素法造模,通过观察大鼠肺组织的形态学变化、肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率变化、血清中IL-6和TNF-α的表达水平、肺组织中CTGF的表达、肺组织匀浆中SOD和GSH-PX的活性及MDA的含量,来探讨肺间质纤维化的发病机制,并观察具有“益气通阳、行气活血化痰”功效的化纤汤对这些指标的影响,以探讨化纤汤对大鼠肺纤维化的保护作用及可能机制,为寻求中医中药对肺纤维化的防治进行实验研究。 方法:健康Wistar大鼠240只,体重180-220克,随机分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、强的松干预组(C组)、化纤汤大剂量(D组)、中剂量组(E组)、小剂量(F组)干预组共6组。A、B、C、D四组每组各48只(其中24只用于肺泡Ⅱ型上皮细胞的提取),E、F组各24只。采用一次性气管内滴注博莱霉素(5mg/kg·bw)法造模,各组均于造模后第二天开始灌胃给药。C组每日一次给予醋酸强的松混悬液(0.32mg/ml)灌胃,D、E、F组每日一次给予化纤汤(浓度分别是2g/ml、1g/ml、0.5g/ml)灌胃,A、B组每日给予一次等容积的生理盐水灌胃,其中强的松和化纤汤用量相当于成人常用量,按体表面积折算。分别于第7、14、28天随机处死A、B、C、D四组的大鼠各8只,取材用于肺泡Ⅱ型上皮细胞的分离和纯化;其余各组大鼠亦于第7、14、28天随机处死8只,用于形态学观察及血清、组织匀浆的制备。①在光镜及电镜下观察肺组织病理形态学的变化及超微结构的改变;②用流式细胞仪检测肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率的变化情况。③用ELISA法检测血清中IL-6、TNF-α表达水平的变化;④用免疫组化SABC法检测肺组织中CTGF的表达;⑤分别用TBA法和比色法检测肺组织匀浆中SOD和GSH-PX的活性及MDA的含量。 结果:①肺大体形态改变:各时间点,A组大鼠双肺呈粉红色,表面光滑,弹性好。B组,第7天,双肺见密集的点状出血灶样瘀斑,肺体积增大;第14天,双肺呈灰白色,局部可见大小不等的结节样改变及陈旧性出血点,肺组织较硬;第28天,双肺苍白,体积缩小,触及较硬,表面结节样改变及条索状凹沟。与B组比较,第7天时,C、D、E、F组两肺外观病理变化明显好于B组,两肺稍暗红,弹性可,其中D、C、E组明显好于F组;第14-28天,D、E组大部分动物两肺颜色稍暗,弹性尚可,偶可见部分肺叶有散在的点状灰色斑块,F、C与B组病变相近。②形态学改变:第7天,B组大鼠肺泡壁增厚,伴有炎性细胞浸润,间质内成纤维细胞增多,病灶内肺泡萎缩,肺泡内大量炎性细胞浸润;第14天,肺泡间隔明显增宽,成纤维化和胶原基质明显增多;第28天,肺泡结构破坏,肺泡壁显著增厚,肺间质纤维化瘢痕形成,毛细血管腔闭塞。超微病理示:B组大鼠第7天,肺泡Ⅱ型上皮细胞增生、肿胀,线粒体肿胀,嵴缩短、断裂或消失,甚至空泡样变性,板层小体数量增多,但是多呈空泡样,细胞微绒毛破坏、稀少或消失;第14-28天,肺泡Ⅱ型细胞数量较第7天减少,核形态不规则,线粒体嵴断裂或消失,大多呈空泡样变性,数量明显减少,板层小体量也减少,大多呈空泡样变。与B组比较,这些病理变化,第7天,D组改善最明显,其次为C、E、F组;第14天,D组改善最明显,其次为E、C、F组;第28天,D组改善最明显,其次为E、F、C组,其中第7天、28天肺泡炎、肺纤维化Szapiel分级比较具有显著性差异(P<0.01或0.05)。③与A组比较,各时间点,各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。与B组比较,第7天时,C、D两组凋亡率均有显著降低(P<0.05);第14-28天,C组肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率有所下降,但统计学无显著差异(P>0.05),D组肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率有显著减少(P<0.05)。④与A组比较,各时间点各组大鼠血清中TNF-α、IL-6水平明显增高。与B组比较,第7天,C、D、E、F各组大鼠血清中TNF-α、IL-6的水平显著降低(P<0.01或0.05);第14-28天,D、E组大鼠血清中TNF-α、IL-6水平明显降低(P<0.01或0.05),C、F组虽有降低,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。⑤与A组比较,各时间点各组大鼠肺组织中CTGF的表达明显增高(P<0.01)。与B组比较,各时间点,C、D、E各组CTGF表达均低于B组(P<0.01或0.05),F组低于B组,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。⑥与A组比较,各时间点,B、C、D、E、F各组大鼠肺组织中GSH-PX、SOD的活性均降低,MDA的含量均增高,存在显著差异(P<0.01或0.05)。与B组比较,各时间点,D、E组大鼠GSH-PX与SOD的活性均升高,MDA含量均降低,存在显著差异(P<0.01或0.05);第7-14天,C组大鼠GSH-PX与SOD的活性均升高,MDA含量均降低,存在明显差异(P<0.05),第28天,C组与B组无明显差异(P>0.05)。各时间点,F组与B组比较无明显差异(P>0.05)。 结论:①模型组病理特征变化与文献报道一致,说明造模成功;化纤汤对肺纤维化发展各个阶段的病理变化有明显的改善作用,且大、中剂量组明显优于小剂量组。②ATⅡ细胞过度凋亡可能促进肺泡炎症反应并导致炎症后纤维增生;化纤汤对ATⅡ细胞可能有抗凋亡作用,可能通过抑制ATⅡ细胞的过度凋亡而起到保护和修复肺泡结构及功能的作用,从而减轻BLM对大鼠肺组织的损伤,延缓并减轻肺纤维化的发生发展。③化纤汤能降低肺纤维化大鼠血清中TNF-α、IL-6水平,可能通过下调上述细胞因子水平而对博莱霉素致大鼠的肺损伤起保护作用,减轻肺纤维化形成的程度,化纤汤大、中剂量组疗效优于小剂量组。④CTGF可能在肺泡炎、肺纤维化的发生发展过程中起着重要的作用,其表达程度与肺纤维化的程度密切相关;化纤汤可能通过抑制CTGF的表达对肺组织起着修复及保护作用。⑤化纤汤能调节肺纤维化大鼠体内自由基水平,减轻自由基对肺组织结构的氧化损伤,而且化纤汤大、中剂量组的作用优于小剂量组。
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

【引证文献】
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7 北京中日友好医院 张纾难;肺纤维化的治疗原则[N];中国中医药报;2000年
8 静雨 译;自发性肺纤维化新疗法[N];中国医药报;2002年
9 李 戎 闫智勇 唐 勇 李文军  王 兴 张天娥 刘明芳 罗蜀蓉;肺纤维化的中医药治疗综述[N];中国中医药报;2003年
10 刘燕玲;恢复期非典患者肺纤维化预防受关注[N];健康报;2003年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 许朝霞;化纤汤对博莱霉素致大鼠肺纤维化干预作用的实验研究[D];湖北中医学院;2007年
2 陈瑞;化纤汤对博莱霉素诱导的大鼠肺损伤干预作用的实验研究[D];湖北中医学院;2006年
3 李丽娜;CpG ODN对肺纤维化形成的作用及其可能机制[D];吉林大学;2010年
4 张波;肺纤方干预肺纤维化大鼠微血管新生的实验研究[D];北京中医药大学;2010年
5 杨俊玲;肿瘤坏死因子-α抑制剂及4种细胞因子表达在肺纤维化诊治中的应用与评价[D];吉林大学;2007年
6 留永健;氯沙坦对博莱霉素导致的大鼠肺纤维化模型的干预作用及其可能机制[D];中国协和医科大学;2001年
7 肖莉;白细胞介素13(IL-13)致肺纤维化作用及干预机制的研究[D];中国医科大学;2004年
8 张彦萍;纤溶酶原激活物抑制剂-1siRNA抗博来霉素诱导的大鼠肺纤维化作用及机制[D];河北医科大学;2011年
9 倪莲芳;II类主要组织相容性抗原在肺纤维化的表达及其机制探讨[D];北京大学;2008年
10 魏路清;阿托伐他汀对实验性肺纤维化的保护及其MMP-9、TIMP-1表达影响[D];中国医科大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 乔晨;股蓝泼尼松片对博莱霉素致大鼠肺纤维化早期治疗机理的初探[D];北京中医药大学;2005年
2 施维;整合素相关激酶与上皮—间充质细胞转化在肺纤维化中的作用[D];华中科技大学;2007年
3 李靖;氟伐他汀对博莱霉素A5致大鼠肺纤维化治疗作用的实验研究[D];青岛大学;2005年
4 刘芳;肝细胞生长因子在大鼠肺纤维化模型中的表达及缬沙坦的相关干预机制[D];武汉大学;2005年
5 张正寿;昆布提取物J201对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的保护作用研究[D];青岛大学;2006年
6 武慧;博莱霉素致肺纤维化动物模型病理观察及三七总皂甙的干预作用[D];苏州大学;2006年
7 连丽燕;表没食子儿茶素没食子酸酯对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制研究[D];苏州大学;2009年
8 蔡志刚;醛固酮拮抗剂对大鼠肺纤维化的干预作用及其作用机制[D];河北医科大学;2004年
9 庞彩苓;益气养阴活血化瘀法对肺纤维化鼠模型TGF-β1的影响[D];浙江中医药大学;2006年
10 赵玉林;槲皮素治疗小鼠肺纤维化的实验研究[D];四川大学;2007年
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