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《湖北中医学院》 2007年
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茵陈泽兰方对急性肝衰竭大鼠肝损伤及肝再生的影响

余立敏  
【摘要】: 目的 观察茵陈泽兰方对急性肝衰竭模型动物的防治作用,并在此基础上观察其防治急性肝衰竭的作用机制,为临床治疗急性肝衰竭提供新的思路。 方法 选取健康清洁级Wistar大鼠110只,雌雄各半,体重200±20g,随机分为6组,即正常组,模型组,促肝细胞生长素组和茵陈泽兰方低、中、高剂量组。其中正常组10只,其余各组均为20只。大鼠禁食过夜(14h以上)后,除正常组外,其余各组用硫代乙酰胺(TAA)600mg/kg皮下注射2次(间隔24h)造模;正常组皮下注射同等剂量的生理盐水。开始至实验结束,正常组、模型组和西药组予生理盐水5ml/kg灌胃,茵陈泽兰方低、中、高剂量组分别给等体表面积比的相应药物灌胃(三组分别给予茵陈泽兰方成人等效剂量、成人等效剂量的5倍、成人等效剂量的10倍剂量进行灌胃)。为防止低血糖,造模期间,除西药组外,所有动物每隔8h皮下注射5ml混合液(3ml 10%葡萄糖、2ml含等量生理盐水与20μmol/L KCl);西药组予促肝细胞生长素2mg/kg,溶于上述防止低血糖的混合液中,每日皮下注射1次,持续3d。动物自由饮食。实验48h后,所有大鼠用3%戊巴比妥钠腹腔注射,麻醉后取腹中线迅速剪开腹腔,用10ml注射器无菌采取腹主动脉血8ml,常规分离血清,-20℃冻存备测。各组随机取大鼠9只,取相同部位的肝组织放入10%中性福尔马林液固定,常规石腊包埋,切片厚4μm,并取部份肝、脑组织迅速放入液氮中冻存。主要观察48h内各组大鼠行为学变化、死亡情况和常规生化方法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil);SABC免疫组织化学法检测肝组织肝细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、肝再生信号调节蛋白α1(SIRPα1)水平;双抗体夹心ELISA法检侧血清TNF-α和IL-6含量;RT-PCR法检测肝组织HMGB1、CD14mRNA和脑组织AQP-4mRNA水平。 结果 1.造模后动物出现活动进食减少,行动变缓,出现昏迷,部分死亡(死亡率为55.0%)。中药组大鼠肝损伤得到较大改观,有部分大鼠可逐渐恢复正常。死亡率方面,用药各组与模型组比较均具有显著性差异(p<0.01)。病理上,与模型组相比较,茵陈泽兰方中、高剂量组肝细胞坏死程度最轻微,其次为西药组和低剂量组;透射电镜下残留肝细胞病理变化较模型组也轻。造模后,反映大鼠肝功能的血清ALT,AST,Tbil水平均明显升高,模型组明显高于正常组,有非常显著差异(P<0.01);西药组及中药各剂量组较模型组低,统计有显著性差异(P<0.01);茵陈泽兰方中、高剂量组与西药组均低,组间无差异(P>0.05);中药低剂量组与西药组之间有差异(P<0.01)。降低血氨方面,中西药各组均有显效(P<0.01),但茵陈泽兰方中、高剂量组较西药组强(P<0.01);有效缩短凝血酶原时间方面情况相似,只是西药组比中药低剂量组更有效(P<0.05)。 2.正常组大鼠肝组织有丝分裂指数(MI)极少,造模后大鼠肝组织MI显著升高(P<0.01),用药后各组肝组织有丝分裂有不同程度增加(P<0.01),以中高剂量组最明显,分别是模型组的2.6倍和3.1倍。低剂量组有丝分裂指数最少,与其它各用药组比有显著性差异(P<0.05-0.01)。正常组大鼠肝组织内仅见少数增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞,表达也较弱。造模组大鼠PCNA表达明显增加,与正常组大鼠相比差异显著(P<0.01);促肝细胞生长素组PCNA染色也明显增多,浓度高,表达范围广;茵陈泽兰方治疗后,大鼠肝组织PCNA表达升高,且随着茵陈泽兰方剂量的增加表达增强,与模型组相比,明显升高(P<0.01-0.05)。但相对于西药组,中药低剂量组表达较少(P<0.01)。 3.正常组大鼠肝组织中,SIRPα1表达水平较低,模型组和促肝细胞生长素组大鼠与其相比,差异均显著(P<0.01)。茵陈泽兰方治疗后,大鼠肝组织SIRPα1表达升高,高、中、低剂量SIRIα1表达均明显高于模型组(P<0.01)。且SIRPα1的表达随着茵陈泽兰方剂量的增加而增加,茵陈泽兰方中高剂量组与模型组比较有显著差异(P<0.01);且与西药组作用相当(P>0.05);但茵陈泽兰方低剂量组大鼠肝组织SIRPα1阳性表达虽然比模型组明显升高(P<0.01),但不及西药组及中高剂量组(P<0.05)。 4.大鼠在皮下注射TAA造模后,模型组、西药组和茵陈泽兰各剂量组血清TNF-α和IL-6含量均较正常组高(P<0.01);但西药组和茵陈泽兰各剂量组较模型组比较则明显下降,其结果有显著性差异(P<0.01);中药茵陈泽兰方低剂量组与西药组比较有差异(P<0.05),提示其效果不及西药组;中高剂量组与西药组比较有显著性差异(P<0.01),提示其效果优于西药组;中药中高剂量组间比较无显著性差异(P>0.05)。 5.正常组HMGB1 mRNA表达很低(0.136),模型组肝组织HMGB1 mRNA表达明显增高(0.429),与正常组比较有显著性差异(p<0.01)。应用茵陈泽兰方后,HMGB1 mRNA相对含量明显下降(0.351,0.246,0.241),与模型组比,各用药组均有明显降低(p<0.05-0.01),中高剂量比西药组和低剂量组都要低(p<0.01)。低剂量组效果最差(p<0.01)。 6.正常组AQP-4 mRNA表达很低,模型组肝组织AQP-4 mRNA表达明显增高,与正常组比较有显著性差异(p<0.01)。应用茵陈泽兰方后,AQP-4 mRNA表达受到了抑制,其相对含量明显下降(0.472,0.336,0.302),与模型组比,各用药组均有明显降低(p<0.05-0.01),而中高剂量组相比西药组和低剂量组都要更低(p<0.05-0.01)。 7.正常组CD14 mRNA表达很低(0.193),模型组肝组织CD14 mRNA表达明显增高(0.697),差异显著(p<0.01)。应用茵陈泽兰方后,CD14 mRNA表达受到了抑制,其相对含量明显下降(0.564,0.419,0.306),与模型组比各用药组均有明显降低(p<0.05-0.01),中、高剂量比西药组和低剂量组都要低(p<0.01)。 结论 1.茵陈泽兰方对急性肝衰竭模型大鼠肝损伤有较好的防治作用,能在一定程度上恢复肝功能,改善肝组织病变,降低死亡率。 2.茵陈泽兰方对模型大鼠急性肝衰竭防治作用的机制可能是:(1)通过降低TNF-α、IL-6和HMGB1等的水平,平衡炎性细胞因子的释放,抑制肝细胞坏死和凋亡,延缓肝细胞进一步损伤,从而阻断急性肝衰竭的发生发展;(2)提高肝细胞有丝分裂指数(MI)及PCNA、SIRPα的表达,促进和调节残留肝细胞的再生;(3)降低脑组织AQP-4 mRNA的表达,调整脑组织的水液代谢平衡,防止急性肝功能衰竭时伴发严重脑水肿,从而降低死亡率。(4)降低肝组织中CD14 mRNA水平,阻止内毒素对肝组织的直接损害,并且抑制内毒素激活各种细胞因子和炎症介质的释放,导致肝损伤。
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

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