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滇丹参指纹图谱及其对细胞损伤保护作用和紫丹活血口崩片工艺的研究

黄超  
【摘要】: 本论文从化学成分和细胞药理学层面比较了滇丹参和丹参的异同,探讨滇丹参作为丹参替代药物的可行性,并对滇丹参的提取、纯化及其成型工艺进行了研究,制备了紫丹活血口崩片。 目的:建立滇丹参指纹图谱质量控制方法,鉴定指纹图谱中主要特征成分,并与药典正品丹参进行对比,从化学成分的层面比较其异同;以H_2O_2诱导损伤的内皮细胞为模型,比较滇丹参与丹参及其与三七总皂苷不同配伍比例对细胞损伤的保护效应,从细胞药理学的层面比较其异同;研究滇丹参提取、纯化工艺及筛选新型辅料,针对心血管疾病特点制备紫丹活血口崩片,为中风后昏迷、吞咽障碍等特殊病人提供一种新型速效制剂。 方法:收集不同产地的滇丹参药材,对影响指纹图谱的主要因素如流动相、色谱柱、提取方法等因素进行了考察,建立滇丹参指纹图谱,并采用LC-MS法对滇丹参指纹图谱中的主要特征色谱峰进行鉴别;同时与相同条件下建立的丹参指纹图谱进行对比。以H_2O_2诱导损伤人脐静脉内皮细胞为模型,以MTT法检测细胞存活率,以流式细胞检测仪分析其对细胞分裂周期的影响,对比滇丹参总酚酸、丹参总酚酸及其与三七总皂苷配伍对H_2O_2诱导损伤内皮细胞保护效应。对滇丹参提取、纯化工艺进行研究,得到适宜的原料,同时经过辅料筛选,压制成能在口腔内快速崩解的片剂。 结果:分别建立了滇丹参水溶性成分的指纹图谱和脂溶性成分的指纹图谱,该方法具有较高的重现性、专属性和可行性。滇丹参水溶性成分指纹图谱与丹参相比,在色谱峰的数与量方面都存在着较大的差异,滇丹参指纹图谱中特征色谱峰相对较多,峰面积相差相对较小,而丹参指纹图谱为丹酚酸B“一峰独大”,其它特征色谱峰数与量均较少。滇丹参脂溶性成分指纹图谱与丹参相比,色谱峰在数的方面基本相仿,即基本成分相似;但在色谱峰在“量”的方面即色谱峰面积相差较大。 滇丹参总酚酸对H_2O_2损伤细胞保护效应的活性要强于丹参总酚酸。滇丹参、丹参的总酚酸和三七总皂苷各配伍组中,活性最强的丹参总酚酸∶三七总皂苷配比值为2∶1,其次为丹参总酚酸∶三七总皂苷配比值为1∶1、滇丹参总酚酸∶三七总皂苷配比值为1∶2和1∶1。总体来说,丹参总酚酸与三七总苷配伍组活性要强于滇丹参总酚酸与三七总苷配伍组。 滇丹参总酚酸的提取纯化过程中工艺的温度是影响丹酚酸B转移率关键因素,通过调节滇丹参提取液的PH值工艺可有效减少干膏率,经过本工艺制得滇丹参总酚酸符合口崩片对原料的要求。当微晶纤维素(MCC)∶交联聚维酮(PVPP)∶低取代羟丙基纤维素(L-HPC)为26∶5.3∶2.7,且在处方中的比例为74%时,经压片成型后的成品符合口崩片质量要求。 结论:建立的滇丹参指纹图谱具有较高的重现性、专属性和可行性,为滇丹参质量控制提供了新的手段。滇丹参水溶性成分种类多,与丹参相差较大,为合理解释滇丹参药理作用强于或相当丹参提供了物质基础。本文发现滇丹参总酚酸对H_2O_2损伤细胞保护效应的活性要强于丹参总酚酸,再次证实了这一观点。本文发现当丹参总酚酸:三七总皂苷配比值为2∶1和1∶1时,对H_2O_2损伤细胞保护效应的活性较强,而且强于滇丹参总酚酸与三七总苷配伍组。这说明丹参总酚酸通过配伍显著地改善了其成分单一的弱势而增强了短期的作用,该比例和配伍为临床应用提供了依据。本文发现,滇丹参总酚酸与三七总皂苷配伍后活性强弱顺序为配比值1∶2>1∶1、2∶1,这一发现对滇丹参资源的充分利用和保护是有重要意义的,因为滇丹参来自野生植物,其资源远较丹参和三七紧缺,这一发现为少量滇丹参经配伍后发挥较大作用奠定了基础。滇丹参经提取纯化后作为原料而制得的口崩片,能60s内在口腔中迅速溶散崩解,以期为特殊病人提供一种新型速效制剂,为市场提供一种新的药物选择。 本论文有关滇丹参的研究均为首次研究。


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