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《湖北中医学院》 2007年
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固本化痰通脉方含药血清对大鼠VSMC增殖及cyclinD_1影响的实验研究

程静  
【摘要】: 目的 研究血小板源生长因子BB(PDGF-BB)刺激下血管平滑肌细胞(VascularSmooth Muscle Cell,VSMC)的增殖规律,建立细胞模型。运用血清药理学方法,从细胞分子水平观察固本化痰通脉方(GHTR)含药血清对大鼠血管平滑肌细胞生长增殖、细胞周期及细胞周期素D_1表达的影响,以探讨其作用机制。 方法 将固本化痰通脉方制成水煎剂,按一定剂量给健康雄性Wistar大鼠灌胃,按照血清药理学实验方法,获取固本化痰通脉方含药血清(简称含药血清)。另选用数只健康雄性Wistar大鼠,取其胸主动脉,分离外膜和内膜后,取其中膜进行原代培养,VSMC的培养采用常规贴块细胞培养方法进行,传至四代后用于实验。随机将细胞分为4组:正常组、PDGF-BB刺激组(模型组)、固本化痰通脉方含药血清高剂量组(简称固高组)、低剂量组(简称固低组),除正常组外,其余三组用PDGF-BB刺激细胞24h,促进细胞增殖。再分别加入大鼠正常血清及不同浓度的固本化痰通脉方含药血清作用24h后,通过MTT、流式细胞技术等测定含药血清对血管平滑肌细胞生长的抑制率,并测定细胞周期及细胞周期素D_1的表达。 结果 1.成功培养原代血管平滑肌细胞。采用贴块法培养的VSMC生长状态良好,细胞纯度高、量多,符合实验要求。倒置相差显微镜下可见细胞呈梭形或长梭形、放射性生长,细胞平行排列成束,部分区域细胞多层重叠,部分区域呈单层,高低起伏,呈现平滑肌细胞典型的“峰”,“谷”状生长。培养至第3代时,用抗α-actin的免疫组织化学染色鉴定,血管平滑肌细胞阳性率>95%。2.用PDGF-BB刺激VSMC增殖并加入GHTR含药血清干预,固高组和固低组均可抑制PDGF-BB的促VSMC增殖作用。与模型组比较,GHTR高剂量和低剂量含药血清可使MTT吸光度值下降,有显著性统计学差异。3.流式细胞术结果显示,PDGF-BB可促进细胞周期的进行并能增加细胞周期素D_1的表达,与正常组比较有显著性差异;GHTR可抑制VSMC由静止期向合成期转变,使VSMC停滞在G_0/G_1期,并下调细胞周期素D_1的表达,与模型组有显著性差异。 结论 1.PDGF-BB能促进VSMC的增殖,GHTR能显著抑制PDGF-BB刺激的VSMC增殖,因而可能具有防治动脉粥样硬化(AS)的作用。2.GHTR可抑制细胞增殖周期的进行,能显著抑制VSMC由静止期向合成期转变,使VSMC停滞在G_0/G_1期。3.PDGF-BB可使细胞周期素D_1的表达增加,而GHTR可明显下调细胞周期素D_1的表达,提示GHTR防治AS作用机理可能与调控血管平滑肌细胞细胞周期素D_1的活性有关。
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

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【参考文献】
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