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《湖北中医学院》 2008年
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淫羊藿苷对成骨细胞BMP-2表达影响的实验研究

柯勇  
【摘要】: 淫羊藿苷(icariin,ICA)是淫羊藿主要有效成分之一。现代中药药理学认为淫羊藿具有补肾壮阳,益精健骨的功效,主要化学成分为黄酮类化合物,包括淫羊藿苷、淫羊藿次苷、脱水淫羊藿素等。转移生长因子(transforming growthfactor,TGF)超家族对成骨细胞的形态学发生、增殖、分化和凋亡中起重要作用,骨形成蛋白(bone morphogenet ic proteins,BMP)是转化生长因子-β(TGF-β)超家族中的一组多功能细胞因子,具有诱导间充质细胞迁徙、增殖、分化,最终导致软骨、骨形成的作用,在体内和体外实验都证明BMP-2有很强的促进成骨细胞分化和诱导体外成骨的能力。本实验探讨淫羊藿苷对成骨细胞BMP-2表达的影响,为淫羊藿苷促进成骨细胞生长提供实验依据,并为淫羊藿苷用于骨科临床调节成骨细胞的功能提供理论依据。 目的检测淫羊藿苷对体外培养的成骨细胞MC3T3-E1中BMP-2表达影响。 方法MC3T3-E1细胞分成4组培养,用0、10、20、40ng/ml不同浓度的淫羊藿苷刺激MC3T3-E1细胞。用倒置相差显微镜观察细胞生长情况;通过四甲基噻唑蓝(MTT)法测绘细胞生长曲线及流式细胞检测仪测定细胞生长周期,描述MC3T3-E1细胞在淫羊藿苷刺激下的增值能力;通过细胞免疫化学染色和Westernbloting对MC3T3-E1细胞BMP-2蛋白表达进行测定。 结果1、在淫羊藿苷刺激下,MC3T3-E1细胞呈多角形,紧密全层排列,胞浆丰富,染色质松散,符合成骨细胞特点;2、10、20ng/ml浓度淫羊藿苷可使MC3T3-E1细胞的生长曲线明显上移,方差分析显示10、20ng/ml组MTT OD值较0、40ng/ml组有显著性差异(P<0.01);10、20、40ng/ml可使MC3T3-E1 S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少,其中10ng/ml组、20ng/ml组作用更为显著,各组间比较差异有统计学意义(P<0.01);3、荧光显微镜下可见DAPI标记的MC3T3-E1细胞核呈蓝色荧光,而免疫细胞化学染色BMP-2蛋白的表达呈现出绿色荧光,对照组和各试验组免疫化学染色均为阳性,其阳性表达分布在胞浆内,10ng/ml组、20ng/ml组阳性细胞数较0ng/ml组、40ng/ml组明显增多,荧光强度增强;4、在31KD各试验组均出现目标条带表达,其中10ng/ml组、20ng/ml组MC3T3-E1细胞BMP-2蛋白量随ICA浓度的增加而增加,呈剂量依赖性特点;40ng/ml组BMP-2蛋白表达量较对照组略有增加,但与10ng/ml组、20ng/ml组比较反而降低。 结论1、细胞生长曲线明显上移和细胞生长周期S期细胞百分率升高,G1期细胞百分率减少提示淫羊藿苷可以促进成骨细胞MC3T3-E1增殖;2、通过细胞免疫化学染色和Western bloting对MC3T3-E1细胞BMP-2蛋白表达进行检测,各实验组阳性表达与对照组比较明显增强提示淫羊藿苷可以增加成骨细胞BMP-2蛋白表达量;3、本实验结果表明淫羊藿苷可能通过上调BMP-2的表达来促进成骨细胞增殖和分化。
【学位授予单位】:湖北中医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R285.5

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