收藏本站
《华中师范大学》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

柑橘指状青霉中两种新型dsRNA病毒的分离鉴定与特性研究

牛玉慧  
【摘要】:指状青霉(Penicillium digitatum)引起的绿霉病是柑橘类水果的主要病害之一,在采后加工、贮藏及运输过程中易引起果实腐烂,从而造成严重的经济损失。化学农药如三唑类药物的长期及大量的施用引发抗药性菌株涌现,这一现象使开发出有效且可持续的真菌生物防治方法更为迫切。真菌病毒是一类可感染真菌并在其体内复制的病毒,研究表明一些真菌病毒的感染可导致其真菌宿主的致病力减弱,具有很好的植物致病真菌防治潜能。柑橘指状青霉中尚未有真菌病毒相关报道,因此筛选并研究指状青霉病毒可为柑橘绿霉病的防治提供新思路,同时为探究真菌病毒的分类进化及真菌病毒与其宿主间的互作机制提供新的参考信息。本文分离鉴定了两株柑橘指状青霉病毒,比较分析了它们对宿主真菌的生理学及形态学影响,探究了其生物防治潜能。本研究主要实验结果如下:1、在柑橘指状青霉菌株HS-RH1中检测到5kb左右dsRNA片段,对该dsRNA进行反转克隆后测序分析表明其全长为5211bp,该序列在GenBank的登录号为KU933932。利用DNAMAN及ORF Finder预测该dsRNA的编码链上有两个开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)。NCBI BLAST比对结果显示它们分别编码外壳蛋白(776aa, 80.6kDa)和RNA依赖性RNA聚合酶(825aa,90.6kDa);分别对其进行聚类分析并构建进化树结果均表明该dsRNA为真菌病毒核酸,且该病毒属于全病毒科(Totiviridae)维多利亚病毒属(Victorivirus)。这两个开放阅读框共享4个碱基的重叠序列,即前三个碱基为第二个ORF的起始密码子,而后三个碱基组成为第一个ORF的终止密码子;该重叠序列上游38bp位置有一个H型RNA假结,此结构特点与Victorivirus属病毒核酸结构相符。提取病毒粒子并进行透射电子显微镜观察,其病毒粒子呈正二十面体结构,直径约35nm,其形态符合全病毒科Victorivirus属。因此将这个病毒命名为指状青霉病毒1(P.digitatum virus 1,PdV1)。2、比较感病菌株HS-RH1及本实验室常用菌株HS-F6的生长速度及对柑橘的致病能力,HS-RH1的生长速度较慢且对柑橘的致病力较弱。对HS-RH1进行脱毒处理得到无毒菌株HS-RH1F,并利用PdV1病毒粒子对HS-F6进行感染实验得到染毒菌株HS-F6V。同样生长条件下,测定得到HS-RH1在PDA培养基上的菌落面积和在柑橘上引起的病斑直径分别为9.04cm2和0.78cm,相应HS-RH1F的菌落面积和引起的病斑直径分别为17.35cm2和4.89cm; HS-F6在PDA培养基上的菌落面积和在柑橘上形成的病斑直径分别为20.53cm2和5.76cm,相应HS-F6V的菌落面积和引起的病斑直径分别为14.29cm2和3.95cm。结果表明柑橘指状青霉病毒PdV1对其宿主的生长活性和致病力有一定的抑制作用。3、对柑橘指状青霉菌株HS-RH2中的5条dsRNA (dsRNA 1-5)进行测序鉴定以及NCBI BLAST分析,结果显示dsRNA 1-3及dsRNA 5共同组成一个属于病毒科Polymycoviridae的新型病毒基因组,将该病毒命名为P.ditatum polymycovirus 1(PdPmV1); dsRNA4为裸露核糖核酸病毒科(Narnaviridae) 一个新型病毒的基因组,将该病毒命名为P.digitatum Narna-likevirus 1 (PdNLV1)。本研究深入探究了PdPmV1,其4 条 dsRNA 长度分别为 2382bp,2336bp, 2016bp 和 1292bp。这四条dsRNA各含有一个ORF,分别编码RNA依赖性RNA聚合酶(760aa,83.8kDa)、假定蛋白(695aa, 75.4kDa)、病毒甲基转移酶(612aa,66.5kDa)和一个富含P-A-S的假定蛋白(261aa,27.3kDa)。4、指状青霉病毒PdPmV1和PdNLV1共同感染对其宿主生长速度和致病力影响力较低。测定感染了这两个病毒的指状青霉对农药咪鲜胺的敏感性,结果显示感病菌株HS-F6I和HS-E9I在咪鲜胺作用下EC50分别为3.809mg/L和0.639mg/L,与对应的野生型菌株 HS-F6 (EC507.896mg/L)和 HS-E9 (EC500.938mg/L)相比下降显著。在喷施过农药的柑橘上接种相应菌株,比较分析表明感染病毒PdPmV1和PdNLV1的指状青霉菌株在同等浓度的农药下致病力较弱。
【学位授予单位】:华中师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S436.66

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 贺立红;汪跃华;兰霞;;拮抗酵母菌对指状青霉菌的抑菌作用[J];仲恺农业工程学院学报;2010年04期
2 宋爱环,李红叶,刘小红;指状青霉(Penicillium digitatum)原生质体制备和再生条件[J];农业生物技术学报;2004年02期
3 王华;陶能国;王长锋;;椪柑精油对指状青霉的抑制作用[J];食品科学;2012年13期
4 郭好礼;;用哈栖木霉(Trichoderma harzianum)的细胞壁分解酶从指状青霉(Penicillium digitatum)的菌丝中制备原生质体[J];生物技术通报;1986年02期
5 韩青梅;赵华;成玉林;姚娟妮;黄丽丽;康振生;;指状青霉Penicillium digitatum侵染柑橘果实的细胞学研究[J];菌物学报;2013年06期
6 汪跃华;徐兰英;庞学群;黄雪梅;张昭其;;苯并噻二唑处理提高采后沙糖橘对指状青霉菌的抗性[J];园艺学报;2010年12期
7 万春鹏;周梦娇;刘洋;陈金印;;桂枝抑制柑橘采后两种病原菌活性物质研究[J];江西农业大学学报;2014年02期
8 ;生物防治[J];生物技术通报;1990年07期
9 陶能国;王华;王长锋;倪俊;罗羽裳;;两株柑橘采后致病真菌的分离及生物学特性研究[J];湘潭大学自然科学学报;2013年03期
10 郭灵芳;刘小娟;吴祖建;章松柏;;双链RNA快速小量提取法在水稻dsRNA病毒病诊断中的应用[J];贵州农业科学;2014年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 田清花;李力强;陈集双;;报春花dsRNA病毒的分子鉴定[A];中国植物病理学会2007年学术年会论文集[C];2007年
2 金波;陈集双;杜志游;陈新爱;;食用菌中的dsRNA病毒检测及其基因组研究[A];中国植物病理学会第六届青年学术研讨会论文集——植物病理学研究进展(第五卷)[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 时仲省;指状青霉有致突变作用[N];中国医药报;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 牛玉慧;柑橘指状青霉中两种新型dsRNA病毒的分离鉴定与特性研究[D];华中师范大学;2017年
2 刘婧;指状青霉(Penicillium digitatum)新的甾醇调控蛋白(SreA)的功能研究及转录组分析[D];华中师范大学;2015年
3 台亚楠;指状青霉DSM 62840转化柠檬烯为α-松油醇的微生物转化研究[D];华中农业大学;2015年
4 王金龙;柑橘指状青霉(Penicillium digitatum)对咪酰胺耐药性分子机制研究[D];华中师范大学;2013年
5 王笑;柠檬烯对指状青霉孢子萌发的作用初探[D];湘潭大学;2015年
6 郑世菊;柠檬醛对指状青霉线粒体的作用初探[D];湘潭大学;2015年
7 金丽;农杆菌介导柑橘指状青霉遗传转化体系的优化及其致病机理的初步研究[D];华中农业大学;2016年
8 伍志;指状青霉MFS转运蛋白基因Pdmfs2的克隆及功能研究[D];华中师范大学;2016年
9 刘圣权;柠檬醛和辛醛对指状青霉孢子萌发的影响[D];湘潭大学;2016年
10 尤亮;农杆菌介导的指状青霉转化体系的建立[D];华中农业大学;2014年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026