收藏本站
《湖北大学》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

磷脂酰胆碱对丁香假单胞菌T3SS组件蛋白翻译、转运的影响

刘伟林  
【摘要】:丁香假单胞菌丁香致病变种1336(Pseudomonas syringae pv.Syringae Van Hall 1336)是一种重要的植物致病菌,其寄主范围广,可以侵害多种木本植物和草本植物的枝、叶、花和果,导致植物产生病变。其毒性与Ⅲ型分泌系统的效应蛋白有关。前期实验研究发现磷脂酰胆碱合酶(PCS)途径是丁香假单胞菌丁香致病变种1336合成磷脂酰胆碱(PC)的唯一途径。在将磷脂酰胆碱合酶基因pcs敲除后,pcs~-缺失突变体无法合成磷脂酰胆碱,缺失磷脂酰胆的丁香假单胞菌丁香致病变种几乎丧失致病能力。而该致病能力的丧失与Ⅲ型分泌系统(T3SS)的功能紧密相关。磷脂酰胆碱缺失对细菌毒性的影响,可能存在的机制有(1)磷脂酰胆碱影响Ⅲ型分泌系统相关基因的表达,(2)磷脂酰胆碱影响Ⅲ型分泌系统相关蛋白从细胞质向细胞膜上转运及在膜中组装,(3)磷脂酰胆碱影响Ⅲ型分泌系统相关蛋白在膜中的拓扑结构。为了探究磷脂酰胆碱的缺失对Ⅲ型分泌系统的功能影响的分子机制,拟从转录水平、翻译水平、转运水平比较Ⅲ型分泌系统相关蛋白在P.syringae pv.syringae van Hall 1336野生型和突变型中的差异。早前实验室在对syringae pv.syringae van Hall 1336野生型和突变型中Ⅲ型分泌系统相关基因转录水平表达量的研究中发现,磷脂酰胆碱缺失不影响Ⅲ型分泌系统相关基因在转录水平上的表达。因此,本研究主要对与Ⅲ型分泌系统组件蛋白的基因进行克隆,表达和纯化,制备多克隆抗体,然后通过蛋白免疫印迹(Western blotting)分析,比较Ⅲ型分泌系统组件蛋白在野生型和pcs~-突变型细胞质和细胞膜上表达量的差异,探索磷脂酰胆碱影响Ⅲ型分泌系统的分子机制。在实验室前期工作的基础上,完成了与T3SS相关的4个基因的克隆并成功构建了原核表达载体,表达并纯化了7个蛋白,成功制备了7个多克隆抗体,完成了与T3SS装置相关的13个蛋白的蛋白印迹分析。在使用Western blot方法对Ⅲ型分泌系统装置中的13个组件蛋白进行分析,结果发现(1)在1336野生型和1336 pcs~-突变型的胞质蛋白中,12个组件蛋白的含量没有显著性差异,仅在野生型胞质蛋白中HrpR蛋白稍多于1336 pcs~-突变型;(2)与野生型相比,1336 pcs~-突变型中HrpB,HrpE,HrpJ和HrpR蛋白的含量呈显著性减少,其余9个蛋白在膜上的含量无显著性差异。1336 pcs~-突变型细胞膜中较少的Hrp B,HrpE,HrpJ和HrpR蛋白暗示磷脂酰胆碱的缺失可能影响蛋白质从细菌细胞质到细菌膜的转运。
【学位授予单位】:湖北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S432.4

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 高必达;丁香假单胞菌环式脂肽毒素的生理和分子生物学研究[J];生物工程进展;2000年04期
2 柯为;细菌造雪剂[J];生物工程进展;1986年04期
3 杨合同;任欣正;王少杰;许勃;许博;;丁香假单胞菌黑斑致病变种的侵染途径与群体动态研究[J];山东科学;1991年04期
4 朱海云;李勃;李燕;柯杨;;丁香假单胞菌猕猴桃致病变种的遗传多样性及进化关系[J];微生物学杂志;2013年04期
5 ;农业其它[J];生物技术通报;1996年01期
6 董红军;伍丽娴;陈三凤;;乙烯合成酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];农业生物技术学报;2007年04期
7 吴慧玲;李召虎;;物理化学诱变选育冠菌素高产菌株[J];科技导报;2009年12期
8 孙国凤;;加拿大冬季奥委会正式采用冰核菌增雪剂SnowMax[J];生物技术通报;1988年12期
9 胡方平;Forster RL;Young JM;;鉴别丁香假单胞菌丁香致病变种和豌豆致病变种的 DNA 探针的制备[J];福建农学院学报;1992年01期
10 ;细菌防止作物冻害[J];微生物学杂志;1984年01期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 熊敏;何火光;龙德亮;王行国;;细菌磷脂酰胆碱影响丁香假单胞菌对植物宿主的致病性[A];2013年湖北省暨武汉微生物学会会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2013年
2 邹保红;田双梅;董汉松;;转录因子AtMYB44通过水杨酸信号通路调控拟南芥对丁香假单胞菌的抗性[A];中国植物病理学会2012年学术年会论文集[C];2012年
3 张佳环;金雪菲;李娟;;丁香假单胞菌Harpin蛋白诱导烟草抗野火病[A];中国植物病理学会2012年学术年会论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 王波;迟缓爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统(T3SS)输送器蛋白及分子伴侣的研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘伟林;磷脂酰胆碱对丁香假单胞菌T3SS组件蛋白翻译、转运的影响[D];湖北大学;2017年
2 严琦;丁香假单胞菌MB03转录调控因子GL003331功能研究[D];华中农业大学;2013年
3 包奇;桑疫病致病菌的快速分离鉴定及其活体定量方法[D];江苏科技大学;2016年
4 刘莹;番茄丁香假单胞菌抗病基因Pto互作蛋白功能分析[D];合肥工业大学;2017年
5 李刚;桑丁香假单胞菌稳产冠菌素关键技术的研究[D];江苏科技大学;2014年
6 代园凤;丁香假单胞菌黄瓜致病变种黄瓜株系和甜瓜株系的分子生物学比较[D];南京农业大学;2013年
7 郑子钦;抗丁香假单胞菌HrpA单链抗体的制备[D];福建农林大学;2013年
8 张晨;拟南芥类脂转移蛋白AtDHyPRP1的亚细胞定位及其对灰霉菌和丁香假单胞菌的抗性功能[D];西北大学;2012年
9 高宇;丁香假单胞菌番茄变种DC3000肽脯酰异构酶1.6?晶体结构研究[D];吉林农业大学;2017年
10 王经;影响丁香假单胞菌冰核蛋白InaQ分泌活性效应基因的研究[D];华中农业大学;2014年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026