收藏本站
《湖北师范大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基于铜离子显色反应的比色免疫传感新方法

黎波  
【摘要】:肿瘤标志物的准确检测对于疾病早期诊断具有十分重要的意义。将基于高特异性免疫反应与荧光、比色、化学发光、电分析化学等信号转导相结合发展起来的免疫传感器用于肿瘤标志物检测,近年来得到了人们广泛关注。其中,比色法由于仪器更为简单,信号转导更加直观方便,因而将其用于免疫传感器信号转导,与其它方法相比具有更好的实用价值。为了进一步提高传统比色免疫传感方法的分析性能,本论文将磁珠分析平台和铜离子显色反应的优良性质与酶催化反应和纳米探针等信号放大策略相结合,在癌胚胎蛋白(CEA)比色免疫传感新方法的构建方面开展了以下工作:1.基于铜离子显色反应的肿瘤标志物比色免疫分析新方法结合磁珠平台上的夹心免疫分析及铜离子显色反应,本工作发展一种可用于CEA肿瘤标志物快速、灵敏检测的比色免疫分析新方法。该磁性免疫分析平台通过在羧基化磁珠表面共价固定包被抗体制备而成。在进行目标分析物CEA的免疫识别后,进一步将制备的抗体功能化氧化铜(CuO)纳米探针用于夹心免疫反应以在磁珠表面形成免疫复合物。定量捕获到该免疫复合物上的CuO纳米标记物接着通过加酸溶解,以释放出其中大量的铜离子。基于新合成的腙类显色剂(E)-1,2-二苯基-2-(2-(吡啶-2-基)亚肼基)乙酮(DPHE)与这些铜离子的配位反应生成一种红色络合物以用于比色信号检出,从而使得该免疫分析方法得以成功建立以用于CEA的灵敏检测。在最佳实验条件下,该方法拥有3个数量级以上的较宽线性范围,检出限为26 pg/ml。此外,该方法还具有成本低廉、操作快速方便、重现性和稳定性好、准确度高等优良性能。2.基于酶致生物矿化碱式碳酸铜的高灵敏比色免疫传感本工作中将酶功能化纳米探针的催化生物矿化碱式碳酸铜与灵敏的铜离子显色反应相结合,发展了一种高灵敏比色免疫传感新方法。该纳米探针通过在金纳米粒子(Au NPs)载体表面组装固定信号抗体和高含量的脲酶制备而成。通过在基于磁珠构建的免疫分析平台上的夹心免疫反应,CEA目标分析物和Au NP/脲酶纳米探针可依次被定量捕获到磁珠表面形成免疫复合物。纳米探针上的脲酶标记物可催化其尿素底物水解反应,产生大量的OH~-和HCO_3~-。进一步加入Cu~(2+)之后,酶催化反应生成的这些离子可以快速与其结合,从而在免疫复合物表面发生碱式碳酸铜的生物矿化。通过将该生物矿化产物加酸溶解释放出其中富集的Cu~(2+)以进行其显色反应,从而可以得到一种红色配合物以用于本方法的高灵敏比色信号转导。在最佳实验条件下,该方法拥有5个数量级宽的线性范围,检出限低至0.45 pg/m L。此外,该方法也具有成本低廉、操作方便,重复性、稳定性和准确度较好等优良性能。3.基于杂交链反应与酶致生物矿化信号放大的高灵敏比色免疫传感结合磁珠平台上的DNA杂交链反应与酶致生物矿化碱式碳酸铜,本工作发展了一种基于铜离子显色反应的高灵敏比色免疫传感新方法。磁珠分析平台上的CEA免疫识别及其进一步特异性结合其核酸适配体链,可以引发两条具有特定碱基序列的发夹DNA链进行相互杂交反应。通过杂交链反应打开的发夹DNA末端标记的生物素对制备的链霉亲和素及脲酶双功能化Au NP纳米标记物的特异性结合,以及接下来酶催化生物矿化碱式碳酸铜作用对铜离子的定量富集、释放与显色反应,从而成功实现了该方法的比色信号转导。由于杂交链反应、纳米多标记信号放大及酶催化生物矿化作用均大大增强了免疫识别事件的信号响应,因而使得该方法具有很高的分析灵敏度。在最佳实验条件下,该方法可在超过5个数量级的线性范围内实现对CEA的准确检测,检测限低至0.071 pg/mL。此外,该方法也具有成本低廉、操作方便,重复性、稳定性和准确度较好等优良性能。
【学位授予单位】:湖北师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:O657.3

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨伟平;周细国;;3种血清肿瘤标志物联合检测对肺癌的诊断价值[J];检验医学与临床;2011年11期
2 马立娜;刘殿骏;王振新;;金纳米粒子探针的合成及应用[J];分析化学;2010年01期
3 韩雪清;杨泽晓;林祥梅;;极具应用前景的生物学检测技术——生物传感器[J];中国生物工程杂志;2008年05期
4 严枫;鞠熀先;;免疫分析与细胞检测新原理与新方法研究[J];化学进展;2007年12期
5 李克成;张明霞;;肿瘤标志物的检测进展[J];医学检验与临床;2006年06期
6 林世蕾,王术皓,刘道杰;免疫分析中的标记试剂[J];化学试剂;2005年08期
7 武宝利,张国梅,高春光,双少敏;生物传感器的应用研究进展[J];中国生物工程杂志;2004年07期
8 刘预;;肿瘤标志物的临床应用及研究进展[J];检验医学与临床;2004年01期
9 乔晓艳,贾莲凤;新型生物传感器在生物医学工程中的应用[J];传感器技术;2002年10期
10 李振甲;放射免疫技术的研究现状与前景[J];标记免疫分析与临床;2000年03期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 赖国松;功能纳米材料信号放大用于高灵敏多通道电化学免疫分析[D];南京大学;2011年
2 孔涛;金纳米颗粒、ZnO纳米结构在癌症治疗和生物传感方面的应用[D];中国科学技术大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何炯;杨媛;张玲;傅斌;;公共建筑室内环境监测技术研究进展[J];建筑节能;2018年07期
2 王天星;钟隆洁;苏凯麒;秦臻;胡宁;王平;;基于微流控技术的体外多参数快速诊断POCT系统的设计[J];传感技术学报;2018年05期
3 万红楠;;免疫分析法在毒品检验鉴定中的应用及发展[J];辽宁警察学院学报;2018年02期
4 刘凤银;陈嘉仪;黄燕璇;凌玉潮;谢薄冰;袁学文;穆洪涛;;快速检测技术在食品安全中的应用现状及发展趋势[J];饮食科学;2018年04期
5 位振亚;罗仙平;梁健;罗才贵;;地下水污染检测技术研究进展[J];有色金属科学与工程;2018年02期
6 马璐;;金纳米花的制备及其SERS性质[J];化学工程与装备;2017年05期
7 孔杜林;吴明书;林强;;9-(2-溴乙基)腺嘌呤合成工艺研究[J];化学研究;2017年01期
8 张茜;王宋蒙;褚立强;;含寡聚腺嘌呤序列DNA探针在金纳米粒子上的固定及杂交性能[J];分析化学;2017年01期
9 王世朋;;环境生物监测的现状及发展趋势[J];四川环境;2016年05期
10 Sattar Abbasi;Mojtaba Servatkhah;Mohammad Mehdi Keshtkar;;Advantages of using gold hollow nanoshells in cancer photothermal therapy[J];Chinese Physics B;2016年08期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 文芳;基于催化活性的双功能纳米材料光化学传感器研究[D];清华大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱将伟;柴春彦;刘国艳;肖红玉;殷传新;史贤明;;己烯雌酚的过氧化氢酶标记及己烯雌酚免疫传感器[J];食品科学;2006年05期
2 夏铀铀,朱正秋;蛋白质组学在消化系统肿瘤中的研究进展[J];实用肿瘤学杂志;2005年04期
3 廖秋林,陈铭声;肺癌患者血清肿瘤活性标志物的检测及其临床意义[J];中国实用内科杂志;2005年06期
4 许会彬,张代民,王援朝,李萍;血清α_1酸性糖蛋白(α_1-AG)检测在糖尿病继发感染中的临床应用[J];临床军医杂志;2005年01期
5 鲁海玲,赵长宏;蛋白组学技术在肿瘤诊断和治疗研究方面的应用[J];实用肿瘤学杂志;2005年01期
6 陈汉忠,蒋金书,李义平;应用电化学免疫传感器检测大片形吸虫抗原抗体反应的研究[J];畜牧兽医学报;2004年03期
7 董文宾,徐颖,姜海英,赵旭博,王顺民,于琴;生物传感器及其在食品分析中的应用[J];陕西科技大学学报;2004年01期
8 郭亚银,屈涛涛,李忠彦;生物传感器在食品工业中的应用[J];包装与食品机械;2003年06期
9 卢业成,刘丽儿,邝燕玲,石亚玲,李穗芬,吴雪辉;电化学发光免疫分析法在AFP定量检测中的应用[J];标记免疫分析与临床;2003年04期
10 高春芳,赵光,宋国英,李冬晖,王秀丽,许洋,马龙华;用飞行质谱技术筛选结直肠癌患者中特异性生物标志物的临床意义[J];中华检验医学杂志;2003年11期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 韩新海;准一维ZnO纳米材料可控制备与物性[D];中国科学技术大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈强;朱惠芳;;表面活性剂存在下二苯氨基脲与镍显色反应研究及应用[J];理化检验.化学分册;1993年03期
2 李嘉会;梁永锋;;正交试验设计法对碘与淀粉显色反应最佳实验条件的研究[J];教育与装备研究;2017年05期
3 黄薇;尼古丁与茜素红显色反应的研究[J];曲阜师范大学学报(自然科学版);2004年02期
4 徐其亨,李祖碧,徐幼虹;超高灵敏显色反应的理论和实践[J];分析科学学报;1998年02期
5 杨元,黄安模,王华洪;二安替比林苯乙烯甲烷与锰(Ⅶ)的超高灵敏度显色反应的研究[J];分析化学;1995年05期
6 夏益琼;;在阳离子表面活性剂和乙醇存在下锆与马尿酸偶氮氯膦的显色反应研究[J];云南冶金;1987年03期
7 都恒坤;江明晶;辛葆红;;meso-四-对羟基苯卟啉与铜显色反应的研究[J];郑州大学学报(自然科学版);1987年01期
8 任英;高志;张佩勋;;DBC-偶氮氯膦与稀土元素显色反应的研究及分析应用[J];分析化学;1987年09期
9 鲁中原;李继善;;应用血清与欧立许氏试剂的显色反应诊断恶性肿瘤的意见[J];实用肿瘤学杂志;1987年01期
10 鲁中原;李继善;;应用血清与欧立许氏试剂的显色反应诊断恶性肿瘤的意见[J];实用肿瘤杂志;1987年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 韩士田;刘彦钦;高焕军;;新型水溶性吡啶-卟啉季铵盐对铜(Ⅱ)显色反应研究[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(下册)[C];2006年
2 敖登高娃;赛音;;钴——水杨基荧光酮——阳离子表面活性剂体系显色反应的研究及应用[A];中国地质科学院南京地质矿产研究所文集(40)[C];1989年
3 吴庆生;丁亚平;倪其道;;meso—四—(4—甲氧苯基)卟啉与镉的显色反应及其双波长和导数光谱行为研究[A];中国地质科学院南京地质矿产研究所文集(40)[C];1989年
4 李在均;潘教麦;沈陈娟;;2,6-二甲苯基重氮氨基偶氮苯与镉显色反应的研究[A];中国化学会第八届多元络合物会议论文[C];2002年
5 梁少俊;何瑞杰;黄智玉;;甲基紫与磷钒钼杂多酸显色反应的研究及应用[A];中国化学会第八届多元络合物会议论文[C];2002年
6 杨屹;蔡汝秀;余席茂;曾云鹗;;DBF—偶氮胂与稀土元素显色反应的研究及其分析应用[A];中国地质科学院南京地质矿产研究所文集(40)[C];1989年
7 刘典梅;李舒婷;王文革;赵书林;;新试剂5-(6-甲氧基苯并噻唑偶氮)-8-羟基喹啉与锌的显色反应研究及应用[A];中国化学会第八届多元络合物会议论文[C];2002年
8 夏心泉;丛俏;高原雪;;新显色试剂苯并噻唑重氮氨基-2,6-二溴-4-羧基苯的合成及与钛的显色反应和应用研究[A];中国化学会第八届多元络合物会议论文[C];2002年
9 宋海南;王玉标;;快速检定微量高价铈的新方法[A];第七届全国微量元素研究和进展学术研讨会论文集[C];2007年
10 韩士田;刘彦钦;高焕君;;新水溶性溴化5-[(4-N-苄基)吡啶基]-10,15,20-(4-N-吡啶基)卟啉,与铜(Ⅱ)显色反应的研究[A];中国化学会第十三届有机分析与生物分析学术会议论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 魏文挺;基于蜂王浆与盐酸显色反应和脂肪酸组成的蜂王浆质量控制研究[D];浙江大学;2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黎波;基于铜离子显色反应的比色免疫传感新方法[D];湖北师范大学;2018年
2 范鑫;苯基荧光酮衍生物对铬(Ⅵ)的显色反应研究[D];河南师范大学;2011年
3 张振乾;有机分析试剂与蛋白质的显色反应及其应用研究[D];湖南大学;2005年
4 陈源;孔雀绿—磷钼杂多酸法测定磷酸二酯酶活性及其抑制剂的影响[D];重庆医科大学;2009年
5 刘琰;糠醛的快速检测方法及其在酿造白酒中的应用[D];湖北工业大学;2013年
6 郝振文;含氟不对称变色酸双偶氮类显色剂的合成及其与金属Bi(Ⅲ)的显色反应的研究[D];华东师范大学;2004年
7 姜良倩;基于光谱显色法检测重金属的光纤传感器的研究[D];贵州大学;2016年
8 周志红;GC-MS在尿素循环障碍诊断和治疗中的应用研究[D];暨南大学;2008年
9 田小娟;太行菊(Opisthopappus taihangensis)产黄酮内生真菌的筛选和鉴定[D];郑州大学;2016年
10 张琤;分光光度法检测水中氨氮毒物前处理的研究[D];华南理工大学;2013年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026