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《湖北师范学院》 2010年
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精氨酸激酶结构及其性质研究

雷婧  
【摘要】: 精氨酸激酶(Arginine kinase, AK)在无脊椎动物细胞能量代谢中承担重要功能。本论文对来源于刀额新对虾的精氨酸激酶(40 kDa)的结构和性质进行了探究。 将编码刀额新对虾(Metapenaeus ensis,M. ensis)AK的基因克隆到原核表达载体pET-28a中,在大肠杆菌中得到了可溶性表达。重组AK依次经过如下步骤得到纯化:CM-Cellulose层析、Sephacryl S-100HR层析以及DEAE-Sepharose层析。动力学常数分析表明:AK对ATP的Km为2.33±0.1 mM,对精氨酸的Km为1.59±0.2 mM。AK正反应的最适pH为8.5,最适温度为30℃。 通过定点突变将AK的68号位酪氨酸残基分别替换成色氨酸和丙氨酸残基,并在大肠杆菌Rosetta中实现了表达,采用His-Tag镍亲和层析柱对突变体进行了纯化。利用酶活力测定、内源荧光、ANS荧光、分子筛排阻层析以及胰蛋白酶部分水解等手段研究其结构和性质的变化。结果表明:与野生型相比,两种突变体的催化活性几乎完全丧失、分子结构趋于疏松、内源荧光发射峰位显著红移、蛋白疏水表面明显增加、Trypsin酶切位点增多。上述结果表明:68号位酪氨酸残基对精氨酸激酶结构维持起着重要作用。
【学位授予单位】:湖北师范学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q55

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