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《湘潭大学》 2001年
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共振光散射法与荧光法测定DNA的研究与应用

刘晨  
【摘要】: 本文在查阅大量文献的基础上,结合本实验室条件,采用新兴 的共振光散射技术建立了几种新的DNA测定方法,并利用多种光谱 手段探讨了其作用机理。 全文分为四章: 第一章:玫苯胺—DNA共振光散射体系的研究与应用。 研究了三苯甲烷类碱性染料玫苯胺与DNA作用的共振光散射光 谱,发现在pH=10.3—11的范围内,玫苯胺在DNA表面聚集导致其 共振光散射增强,在485nm处,存在一共振光散射增强峰,其强度 与DNA的浓度呈线性关系,据此建立了一种测定DNA的共振光散射 法。该方法简便、快速、灵敏度高,线性范围为0—1000μg/L, 相关系数为0.9980,检出限为14.20μg/L。将该方法用于混合样 品中DNA的测定,结果令人满意。 第二章:结晶紫—DNA共振光散射体系的研究与应用。 试验表明,在pH=9.2—10.5的Tris—NaOH缓冲溶液中,DNA的加入 导致结晶紫共振光散射的增强,512nm处的共振光散射峰的增强与DNA 浓度在0—900μg/L内呈线性关系,相关系数为0.9950,检出限可达 5.02μg/L。方法已成功用于混合样品中DNA的测定。与其它测定DNA 的共振光散方法相比,本方法的测量波长红移,可有效降低背景干 扰,增强共振光散射信号。此外,本章结合共振光散射光谱和紫外 吸收光谱初步探讨了两者的作用机理。 第三章:小檗碱—fsDNA共振光散射体系的研究与应用。 研究了中药黄连素的有效成分——小檗碱与fsDNA作用的共振 光散射光谱。在pH=2.0—2.8的酸性介质中,小檗碱308nm处共振 光散射峰的增强与fsDNA的浓度呈线性关系。方法的线性范围为 0—600μg/L,相关系数为0.9972,检出限为19.92μg/L。方法已 成功用于混合样品中fsDNA的测定。结合试验所得紫外—可见吸收 光谱、共振光散射光谱和已有文献的研究结果,可推断小檗碱与 DNA作用经历了由以聚集结合方式为主到以嵌入结合方式为主的转 变。 第四章:灿烂甲酚蓝一皿阶体系作用机理及其分析应用。 第一节研究了灿烂甲酚蓝一DNA共振光散射体系。在 p炸0.&-1.5的Trigrryautl介质中,DNA使灿烂甲酚蓝共振光散 射增强,在347n处,共振光散射峰的增强与DNA浓度呈线性关 系。方法的线性范围为 SG--1000pg/L,相关系数为 0.9962,检出 限为 23.30V g/L。将该方法用于混合样品中 DNA的测定,结果令人 满意。 第H节研究了灿烂甲酚蓝一DNA荧光稗灭体系。在pH=5.a 9.0的范围内,于入 H81nm,入砰70。处k 可定量淬灭灿烂 甲酚蓝的荧光。方法的线性范围为 0.Ind.sing/L,相关系数为 0.9964,检出限为 88.01Vg/L。该方法具有较大的斯托克斯位移, 可有效降低背景干扰,提高测定的灵敏度。 第三节研究了灿烂甲酚蓝与DNA作用的紫外吸收、荧光、共 振光散射光谱,结合灿烂甲酚蓝本身在溶液中的存在状态,通过荧 光偏振、荧光狩灭等试验的研究结果,认为灿烂甲酚蓝与DNA的作 用随灿烂甲酚蓝与DNA质量比的减小经历了从以聚集结合方式为主 到以嵌入结合方式为主的转变。
【学位授予单位】:湘潭大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:O657.3;Q503

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【参考文献】
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