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《湖南大学》 2013年
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靶向HCV包膜蛋白的信标适体应用于病毒检测的研究

余琴琴  
【摘要】:丙型肝炎病毒(HCV)感染了全球大约3%(约1.7亿)的人口,是肝脏疾病的主要病原体之一,可导致急性或慢性感染,慢性丙型肝炎可发展成肝硬化或肝癌,丙型肝炎每年新发病例约3.5万例。HCV以血液传播为主,发病隐匿,且症状不典型,患者容易因未能及时诊断而错过治疗的最佳时机。目前尚未开发出有效的HCV疫苗,现有的HCV临床检测存在窗口期较长,容易出现漏诊或假阳性检测结果,难以满足大通量检测和血液快速筛查的要求。因此,改善和发展HCV早期检测的新方法迫在眉睫。 HCV包膜蛋白E1、E2是HCV病毒颗粒的结构蛋白,它们以非共价键形成异二聚体E1E2,主要参与细胞受体相互作用,诱导机体产生中和抗体,在病毒的感染和病毒颗粒的形成过程起关键作用,对HCV包膜蛋白的研究是热点之一。 本论文成功扩增出HCV E1E2,并将目的基因插入到pET28b载体中,进行诱导表达和纯化,得到大量E1E2蛋白。本论文首次以HCV包膜蛋白E1E2为靶分子,经指数富集配体系统进化技术(SELEX)筛选出特异性结合的核酸适体—Aptamer。进一步进行体外原核表达HCV E1、HCV E2蛋白,运用ELONA法(酶联寡核苷酸检测法)对筛选出来的Aptamer的特异性从反面进行了鉴定,结果发现筛选出的Aptamer能特异性地识别E1E2蛋白和E2蛋白,而不识别E1蛋白。将筛选得到的Aptamer修饰成分子信标核酸适体(molecular beacon aptamer,MBA),简称信标适体。Aptamer实现了“信号探针”的转化,并运用MBA实现了重组E1E2蛋白、E2蛋白nM级的检测以及被病毒感染的细胞上清中包膜蛋白的检测。 信标适体(MBA)有望成为HCV包膜蛋白在病毒生活周期机制研究的新的重要手段和桥梁,为HCV的早期检测提供一种新思路新方法,MBA有望成为一种新型的HCV早期检测试剂,发展成为HCV早期诊断的新方法。
【学位授予单位】:湖南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R373.21

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