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《湖南大学》 2009年
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核酸适体探针对血液肿瘤细胞的识别及其稳定性研究

邓珂  
【摘要】: 血液肿瘤是威胁人类健康的常见恶性肿瘤之一。对血液肿瘤细胞的准确分型,有利于实现血液肿瘤的早期诊断和治疗并提高血液肿瘤的治愈率。基于SELEX技术筛选的核酸适体探针不仅具有类似于抗体的高亲和力和高特异性,在许多方面更优于抗体,有望作为一种新型的“诊断抗体”,应用于血液肿瘤的诊断与治疗。本论文瞄准这一前沿研究方向,围绕基于细胞-SELEX技术筛选的核酸适体探针对血液肿瘤细胞的识别及其在血液中的稳定性研究,开展了以下三个方面工作: 1、基于细胞-SELEX技术筛选的核酸适体探针对不同环境中恶性淋巴瘤细胞的识别研究 采用流式细胞术,系统地考察了基于细胞-SELEX技术筛选的用于特异性识别恶性淋巴瘤Ramos细胞的核酸适体探针TD05对置于不同环境中的体外培养Ramos细胞和原代培养Ramos细胞的识别效果,并与针对Ramos细胞细胞膜表面抗原的特异性抗体CD19识别Ramos细胞的情况进行比较。结果表明:TD05能有效识别置于不同环境中不同来源的Ramos细胞,显示出优越的反应条件适应性。它有望作为一种新型“诊断抗体”,在血液肿瘤的早期诊断与临床检测中发挥重要作用。 2、基于细胞-SELEX技术筛选的核酸适体探针血液稳定性研究 分别采用20%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和流式细胞术,对核酸适体探针TD05在血液中的稳定性进行了考察。在不影响核酸适体探针识别肿瘤细胞的亲和力和特异性的前提下,通过反转T碱基和锁核酸这两种化学修饰方法分别对TD05进行修饰,并对修饰后的TD05的血液稳定性进行了考察。在此基础上,采用流式细胞术检测了修饰后的TD05对肿瘤细胞的亲和力和特异性的变化。结果表明:反转T碱基和锁核酸的修饰能有效提高TD05的血液稳定性,使TD05的半衰期从0.5小时延长至3小时以上,并且不影响其识别Ramos细胞的亲和力和特异性,为进一步实现核酸适体探针TD05在活体检测中的应用提供了技术支持。 3、基于细胞-SELEX技术筛选的核酸适体探针识别构型的初步探讨 通过对基于细胞-SELEX技术筛选的用于特异性识别急性白血病细胞的核酸适体探针sgc8c分别进行荧光淬灭、荧光共振能量转移标记以及PEG和互补序列修饰,通过采用流式细胞术对经修饰的sgc8c识别急性白血病CCRF-CEM细胞的情况考察,对sgc8c识别细胞时所形成的三维构型进行了初步探讨。结果表明:sgc8c在识别CCRF-CEM细胞时,其5′端和3′端很可能形成杂交,且此杂交部分对识别CCRF-CEM细胞起着十分重要的作用。这些结果的获得为进一步实现核酸适体探针sgc8c应用于肿瘤的诊断检测提供了参考依据。
【学位授予单位】:湖南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R733

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