收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

锁核酸修饰的分子信标用于核酸和蛋白检测的研究

李晓平  
【摘要】: 分子信标具有可转换的发夹结构、高效的信号转换机制、灵活的化学修饰和简便的操作等优势,在生物医学研究中得到广泛应用,特别是在蛋白质分析、酶的活性检测、活细胞mRNA追踪以及生物化学传感等领域中体现出独特的优势。随着人们对分析检测的要求不断提高,设计和开发新型分子信标,克服常规分子信标在选择性、灵敏度、抗酶切等方面的不足,是十分必要的。本文将锁核酸(Locked nucleic acid, LNA)引入分子信标的结构中,设计了一种新型的茎部修饰锁核酸的分子信标(Locked nucleic acid modified molecular beacon? LMB),并将它与脱氧核糖核酸酶Ⅰ(DNase I)相结合应用到核酸和蛋白质检测分析中,实现了目标物的简单、快速、灵敏的分析检测。本文开展的研究包括: 一、锁核酸修饰的分子信标用于DNA检测的研究 基于LMB的特性,结合DNase I酶切放大原理发展了一种DNA检测的新方法。当目标DNA与LMB杂交之后,LMB荧光增强,再加入DNase I,杂交产物被切割,荧光信号能够在杂交的基础上得到进一步的提高。而没有目标DNA存在时加入DNase I, LMB荧光基本不变。该方法不但操作简便,快速,而且相对于普通的分子信标,检测下限降低了25倍,达到1.6×10-10M。 二、锁核酸修饰的分子信标用于RNA检测的研究 在DNA放大检测的基础上,将LMB与DNase I结合,发展了一种循环放大检测RNA的新方法。目标RNA与LMB杂交之后,LMB环部被DNase I水解,溶液荧光增强,而RNA则被释放出来并与另一个LMB结合。如此循环往复,溶液荧光不断增强,实现对RNA放大检测的目的。该方法设计简单、灵敏度高,检测下限为1.0×10-13 M,与常规分子信标相比,检测限降低了4个数量级。 三、锁核酸修饰的分子信标用于蛋白质检测的研究 在核酸检测分析的基础上,将LMB和DNase I结合,以凝血酶作为模型,发展了一种蛋白质检测的新方法。在DNase I存在的条件下,与凝血酶结合的核酸适体(aptamer)被保护,未结合的核酸适体被水解。加入抗酶切的LMB,竞争结合凝血酶所保护的核酸适体,使得LMB的荧光恢复,从而实现对凝血酶的检测,检测下限为1.0×10-10M。该方法特异性好,无需酶灭活等繁琐的操作,有望实现对复杂体系中蛋白质的定量检测。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 云中客;能诊断癌症的分子信标[J];物理;2001年07期
2 赵军;贺大林;;分子信标在活细胞研究中的应用新进展[J];国际生物制品学杂志;2006年02期
3 于黎娟;;分子信标的研究现状及应用[J];科技信息;2010年21期
4 张新;鹿新红;;活细胞荧光原位杂交——分子信标成像技术[J];兵团医学;2007年04期
5 安江宏;陈正堂;;分子信标在活细胞内的应用[J];生命的化学;2010年05期
6 陈忠斌,王升启,孙志贤;分子信标核酸检测技术研究进展[J];生物化学与生物物理进展;1998年06期
7 孔德明,蒋海燕,沈含熙,宓怀风;分子信标用于不对称PCR检测乙型肝炎病毒[J];分析测试学报;2005年02期
8 王冰;扈庆华;石晓路;李庆阁;郑琳琳;林一曼;段永翔;;产单核李斯特菌的改良分子信标荧光PCR-磁捕获快速检测体系的建立[J];现代预防医学;2009年13期
9 曹冉冉;刘邦英;周子人;高文凤;杨德会;杨洪;刘衡川;;分子信标荧光定量PCR在肺结核早期诊断及疗效评价中的初步应用[J];中国防痨杂志;2012年02期
10 贾沪宁;叶宝芬;严拯宇;;量子点分子信标的制备及其在核酸检测中的应用[J];化工进展;2012年05期
11 余丽丽;姚琳;杨黎燕;李仲谨;;新型核酸分子荧光探针——分子信标的研究进展[J];化学与生物工程;2012年04期
12 刘衡川;徐亚军;周子人;李水明;;分子信标荧光定量PCR法在结核病临床诊断中的应用[J];现代预防医学;2008年10期
13 李洋;薛建鹏;崔思思;田俊梅;章冬银;曹洁;顾月清;;金纳米荧光分子信标对活细胞中STAT5b mRNA的检测[J];科学通报;2013年07期
14 陈庆海;景秀;颜坤;华兴;张波;府伟灵;;婴幼儿人巨细胞病毒基因分子信标杂交荧光检测的研究[J];中华妇幼临床医学杂志;2009年02期
15 王立朋;何云燕;夏云;王慧娟;;核酸序列依赖扩增联合分子信标对曲霉菌感染的检测效果[J];第三军医大学学报;2013年15期
16 吴平芳;石晓路;郑琳琳;扈庆华;李庆阁;张佳峰;庄志雄;刘小立;张顺祥;王冰;贺连华;林一曼;;改良分子信标-实时PCR快速检测志贺菌[J];中国卫生检验杂志;2006年04期
17 陈庆海;匡红;府伟灵;华兴;边志衡;向阳;;荧光显微观测Rpsl基因突变DNA分子探针杂交研究[J];西部医学;2009年02期
18 何艳;张锦泉;邓阳勇;张水波;;适体分子信标荧光共振能量转移法检测尿腺苷[J];中外医学研究;2014年14期
19 方梅;陆巧荣;洪志强;;分子信标荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法建立及其临床应用[J];四川大学学报(医学版);2010年01期
20 徐亚军;周子人;林琳;刘渠;刘衡川;;分子信标荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌方法的初步研究[J];四川大学学报(医学版);2008年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春明;朱志;宋彦龄;谭蔚泓;杨朝勇;;新型光调控分子信标的设计与合成[A];中国化学会第27届学术年会第03分会场摘要集[C];2010年
2 薛秀蕾;吴国球;;一种用于人乳头瘤病毒基因分型检测的分子信标-实时PCR方法[A];中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2012年
3 羊小海;李晓平;王青;王柯敏;郭秋平;崔亮;薛曹叶;;基于锁核酸分子信标和酶放大检测RNA[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
4 廖农;高建华;曾位森;赵伟;罗秋生;;实时PCR分子信标检测P53基因SNP方法的建立[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
5 杨朝勇;;用于细胞内基因成像的新型核酸探针的设计与合成[A];中国化学会第26届学术年会化学生物分会场论文集[C];2008年
6 于黎娟;禚林海;乔光明;高源;唐波;;核酸酶双纳米金分子信标用于细胞内成像[A];中国化学会第27届学术年会第04分会场摘要集[C];2010年
7 李博;顾大勇;司徒博;李政良;颜晓慧;刘芹兰;郑磊;王前;;HIV-1电化学活性-非活性开关分子信标的构建及验证[A];中华医学会第七次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2012年
8 柯国梁;葛韵;王春明;朱志;杨朝勇;;基于非天然碱基L-DNA分子信标的细胞温度计[A];中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集[C];2012年
9 马佳;刘楠;马新华;李晓丽;欧国荣;高志贤;周志江;;水环境中超痕量汞离子的分子信标荧光检测技术研究[A];天津市生物医学工程学会第三十四届学术年会论文集[C];2014年
10 梁红艳;赵弘;姜晓峰;;CRTH2基因多态性与IL-13表达关系的研究[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 唐红星;核酸探针技术用于mRNA检测的研究[D];湖南大学;2008年
2 金燕;原子力显微镜用于核酸相互作用的研究[D];湖南大学;2004年
3 刘斌;荧光分子探针技术在基因表达产物研究中的应用[D];湖南大学;2007年
4 姚权;磁性纳米颗粒连接miR-155分子信标用于非小细胞肺癌诊断的实验研究[D];第三军医大学;2012年
5 安江宏;壳聚糖纳米包裹miR-155分子信标实时成像肺癌细胞的实验研究[D];第三军医大学;2008年
6 吴继魁;基于新型分子信标和胸腺嘧啶—汞(Ⅱ)配位作用的DNA和Hg~(2+)检测技术研究[D];华东师范大学;2010年
7 王宏;用于单碱基错配识别的核酸微阵列新技术[D];东南大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴卓夫;一种新型催化分子信标的设计及性质研究[D];吉林大学;2006年
2 陈小洪;新型分子信标的合成及其性能研究[D];湖南大学;2007年
3 谭雪莲;配合物型电化学活性—非活性转换分子信标的设计及其性质研究[D];华东师范大学;2008年
4 罗娟娟;DNAzyme电化学催化活性分子信标的研制及其应用研究[D];华东师范大学;2012年
5 刘婷;新型电化学活性及催化活性分子信标开关的研制及其应用研究[D];华东师范大学;2014年
6 邹亚娟;基于分子信标的尿嘧啶DNA糖苷酶活性测定[D];上海交通大学;2007年
7 蔺凯;非标记信号增强型荧光分子信标的构建研究[D];陕西师范大学;2010年
8 匡红;结核分支杆菌高特异性分子信标设计及荧光芯片运用的初步研究[D];第三军医大学;2007年
9 徐亚军;分子信标荧光定量PCR快速检测结核分枝杆菌技术及产品的开发[D];四川大学;2007年
10 庞艳平;Molecular beacon检测mRNA的方法研究与应用[D];上海交通大学;2008年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978