收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

GnRH拮抗剂Cetrorelix在子宫内膜癌治疗中作用机制研究

张志凌  
【摘要】:目的:本研究通过用不同浓度的GnRH拮抗剂cetrorelix作用于体外培养的人子宫内膜癌ishikawa细胞株,观察作用不同时间后癌细胞的生长抑制率和细胞周期、凋亡率的变化,探讨cetrorelix对子宫内膜癌细胞的增殖、凋亡抑制机制。通过比较GnRH拮抗剂cetrorelix处理前后人子宫内膜癌细胞蛋白质表达谱的变化,从整体蛋白质水平来揭示GnRH拮抗剂作用于子宫内膜癌细胞的分子机制,也为临床上应用GnRH抗剂治疗子宫内膜癌提供理论依据。 方法:1)联合应用组织芯片和免疫组化技术检测不同分化程度不同临床期别子宫内膜癌组织中促性腺激素受体(GnRH-R)的表达;2)MTT法检测不同浓度GnRH拮抗剂cetrorelix单用或与紫杉醇联用对子宫内膜癌ishikawa细胞生长抑制率,确定cetrorelix对子宫内膜癌细胞增殖抑制的最佳浓度;流式细胞技术检测作用后细胞周期与凋亡率变化;3)利用固相梯度双向凝胶电泳技术建立药物处理前后细胞总蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest软件分析,选取差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析,获得蛋白质点肽质量指纹图谱,Mascot软件搜索MSDB数据库鉴定蛋白质。4)采用Westernblot技术对部分差异表达蛋白质进行验证。 结果:1)正常子宫内膜组织GnRH-R蛋白全部表达为阳性,阳性表达率为100%(7/7)。子宫内膜癌组织中GnRH-R蛋白阳性表达率为94%(59/63),二者差异无显著性(P0.05)。不同期别子宫内膜癌组织中GnRH-R蛋白阳性表达率分别为Ⅰ期97%(55/57),Ⅱ期80%(4/5),Ⅲ期GnRH-R蛋白表达为阴性。不同分化程度子宫内膜腺癌组织中GnRHR蛋白阳性表达率Ⅰ级94%(33/35),Ⅱ级94%(17/18),Ⅲ级为86%(7/8)。不同临床期别和不同病理分级中子宫内膜癌组织中GnRH-R蛋白阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P0.05)。2)GnRH拮抗剂对人子宫内膜癌ishikawa细胞的增殖具有抑制作用,GnRH拮抗剂cetrorelix抑制子宫内膜癌ishikawa细胞生长呈时间和剂量依赖(P0.05),随药物浓度增加和作用时间延长,抑制作用越明显。10-5 mol/L Cetrorelix作用72h时达最大抑制率。联合使用cetrorelix和紫杉醇对子宫内膜癌ishikawa细胞生长的抑制优于二者单用。3)流式细胞仪检测显示10-5 mol/L Cetrorelix作用72h可引起子宫内膜癌ishikawa细胞的生长周期停滞于S期,细胞凋亡率增加;4)经双向凝胶电泳和图像分析,找出差异蛋白质点53个(差异在2倍以上且在3组中均有相同的差异),其中在处理组表达上调的12个,表达下调的33个,仅在处理组中表达的3个,仅在对照组中表达的5个。筛选31个蛋白质点作为差异表达的蛋白质点进行质谱分析,有21个蛋白得到鉴定,经质谱鉴定的蛋白包括7个处理后表达下调的蛋白即:α-烯醇化酶(ENO1)、热休克蛋白90(HSP90)、蛋白质二硫键异构酶(PDIA6)、抑制素(Prohibitin-2)、丝裂原活化蛋白激酶(MAP2K2)、真核翻译延伸因子1A2(EEF-1 A2)、膜联蛋白(annexin Al)。5)应用Western Blot技术对Annexin Al和α-烯醇化酶进行验证,Annexin Al和α-烯醇化酶在处理组中表达下调,与蛋白质组学的结果一致。 结论:GnRH受体可能在子宫内膜癌的发生和发展过程中起一定作用。GnRH拮抗剂cetrorelix能有效抑制子宫内膜癌细胞生长,可能通过参与细胞周期的调控,诱导细胞凋亡发挥作用,并可增加肿瘤细胞对紫杉醇的敏感性。从蛋白质组学研究中鉴定的蛋白质的功能中,发现GnRH拮抗剂cetrorelix可能通过影响细胞能量代谢和干预细胞骨架、转录和翻译、细胞内信号传导、凋亡等多条途径发挥作用。这一结论为进一步了解GnRH拮抗剂的作用机制以及临床应用GnRH拮抗剂预防和治疗子宫内膜癌提供了理论和实验依据。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 肖红;张鸥;王巍;;电针“石门”穴对小鼠着床期下丘脑GnRH影响的实验研究[J];实用中医内科杂志;2009年11期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
11 ;[J];;年期
12 ;[J];;年期
13 ;[J];;年期
14 ;[J];;年期
15 ;[J];;年期
16 ;[J];;年期
17 ;[J];;年期
18 ;[J];;年期
19 ;[J];;年期
20 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;The Existence of Gonadotropin-Releasing Hormone(GnRH) Immunoreactivity in the Brain of Horseshoe Crab,Tachypleus tridentatus[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
2 张朝晖;崔毓桂;仲远明;王茵萍;王雪松;丁贵鹏;居小斌;;低频电针对大鼠性发育前后下丘脑GnRH释放效应的实验观察[A];2011中国针灸学会年会论文集(摘要)[C];2011年
3 艾星子·艾里;胡文静;杨新华;丁岩;季菲;;腹腔镜卵巢子宫内膜异位囊肿手术联合GnRH治疗对卵巢储备功能影响[A];中华医学会第三次全国绝经学术会议暨绝经相关问题学习班论文汇编[C];2011年
4 冯碧云;叶海辉;黄辉洋;尚丽丽;李少菁;;GnRH在拟穴青蟹神经器官和性腺中的免疫组织化学定位[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
5 苏娟;雷治海;张文龙;姚远;李珣;刘延鹏;刘晶;蔻芮;;Orexin B在下丘脑的分布及其与GnRH和OB-Rb的关系[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
6 叶文剑;刘桂琼;胡杰;姜勋平;;GnRH-Ⅰ核酸疫苗的研究进展和应用[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
7 凌泽继;黎金秀;秦津;潘堂峰;宋小白;杨柄壮;许典新;韩涛;潘琼;李瑞明;谢莹雪;周辰瑜;;GnRH在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十六次学术研讨会论文集[C];2010年
8 ;The Existence of Gonadotropin-Releasing Hormone(GnRH) Immunoreactivity in the Central Nervous System and Gonad of the Swimming Crab,Portunus trituberculatus[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
9 程军平;周宁;迟晓丽;王涛;周文霞;刘克良;张永祥;;新型GnRH拮抗剂的筛选与评价[A];中国药理学会第十一次全国学术会议专刊[C];2011年
10 冯碧云;黄辉洋;叶海辉;尚丽丽;李少菁;;GnRH受体在拟穴青蟹神经器官中的免疫识别[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张志凌;GnRH拮抗剂Cetrorelix在子宫内膜癌治疗中作用机制研究[D];中南大学;2011年
2 魏锁成;GnRH-A免疫对家兔生殖功能的调节作用及机理研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 魏锁成;GnRH-A免疫对家兔生殖功能的调节作用及机理研究[D];甘肃农业大学;2010年
4 周晓苏;许氏平鲉和半滑舌鳎促性腺激素释放激素(GnRH)基因的克隆和表达分析[D];中国海洋大学;2012年
5 黄凤英;GnRHⅡ在子宫内膜异位症患者中的表达及其对离体培养内膜间质细胞的作用[D];中南大学;2009年
6 张英;GnRH类似物对卵巢癌和卵巢功能的双重调节作用的研究[D];复旦大学;2011年
7 赵雪静;促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRHant)预防化疗损伤性卵巢功能早衰的实验研究[D];第四军医大学;2011年
8 王新;不同脉冲频率GnRH调节大鼠GTH表达的受体后信号转导机制研究[D];吉林大学;2007年
9 杨春;leptin调节下丘脑神经肽Y分泌的研究[D];河北医科大学;2005年
10 王莉;促性腺激素释放激素在饲饵性高脂妊娠大鼠胰腺和肠道中表达的研究[D];第四军医大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 徐元青;牦牛GnRH基因的克隆及其在妊娠期的表达机理[D];兰州大学;2011年
2 丁海珍;雌激素对青春期前雌性大鼠下丘脑GnRH表达和分泌的影响[D];南京医科大学;2010年
3 相元翠;GnRH拮抗剂和雌激素联合应用预防顺铂所致小鼠卵巢损害的实验研究[D];郑州大学;2011年
4 宋聪颖;孕酮、干扰素τ对牛子宫内膜细胞GnRH信号传递依赖通路基因表达的影响[D];四川农业大学;2011年
5 赵明;半滑舌鳎生殖生理特性及GnRH克隆初步研究[D];中国海洋大学;2011年
6 杨智莺;GnRH受体在米非司酮诱导PCOS大鼠垂体中的表达及意义[D];广州医学院;2010年
7 颜泉梅;GnRH和GDF9基因多态性研究及其与山羊产羔数的关联分析[D];西北农林科技大学;2010年
8 李宁;GnRH激动剂联合雌激素预防顺铂对小鼠卵巢的损伤作用[D];郑州大学;2011年
9 刘丽平;番鸭GnRH基因的cDNA克隆及就巢相关基因的差异表达研究[D];福建农林大学;2012年
10 敖晶晶;睾丸切除改变小鼠下丘脑亨廷顿蛋白相关蛋白1表达[D];华中科技大学;2009年
中国重要报纸全文数据库 前5条
1 医文;良性前列腺增生药Cetrorelix后期临床试验结果问世[N];中国医药报;2009年
2 方舟子;专家更应慎言[N];经济观察报;2010年
3 孙晓梅;默克雪兰诺搭建生殖学术界交流平台[N];中国医药报;2010年
4 上海岳阳中西医结合医院神经内科 张秋娟 主任医师;月经紊乱须警惕脑垂体泌乳素瘤[N];上海中医药报;2010年
5 记者 陈斐然;中药治疗子宫内膜异位症研究通过验收[N];中国中医药报;2011年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978