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《中南大学》 2011年
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小檗胺诱导Burkitt淋巴瘤Raji细胞凋亡的实验研究

杨烁  
【摘要】:非霍奇金淋巴瘤(NHL)是一组发生于淋巴结和(或)结外部位淋巴组织的恶性肿瘤,通常NHL患者对传统的化疗方案(如COP,CHOP等)表现出较好的反应,但多数往往在达到缓解后数月至数年的时间内出现复发。加大剂量的强化疗仅能使部分患者达到长期的缓解,但同时带来较大的药物毒性及较高致死率。因此寻求治疗NHL的新手段成了当前的一个紧迫问题。 祖国传统中药小檗胺提取于小檗属植物的根茎,是一种钙调素拮抗剂。体外和动物实验显示小檗胺对多种恶性肿瘤有抗癌活性,其作用机制为改变钙调素的分子构象,抑制钙调素调控的靶酶,从而影响细胞的代谢、周期生长及其他生物活性,发挥抗肿瘤效应,其毒副作用小,与常规化疗药物合用有效应相加作用。 本实验从细胞生长增殖、凋亡及凋亡相关蛋白表达等细胞生物学行为的角度,探讨小檗胺对淋巴瘤细胞株Raji细胞的影响。我们采用Wright-Giemsa染色法观察细胞凋亡的形态学变化;MTS法分析小檗胺对淋巴瘤细胞增殖抑制作用;采用流式细胞术分析小檗胺对细胞凋亡的影响;DNA片段化检测Raji细胞是否出现了"DNA梯子”的凋亡细胞表现;用Westernblot分析细胞内PARP(活化caspase3切割底物)的表达水平。结果显示,在0-32ug/ml小檗胺作用下,随着小檗胺浓度的升高,Raji细胞的存活率逐步降低,此外,小檗胺对Raji细胞的生长抑制也呈时间依赖性,同一浓度下,药物作用时间越长,细胞存活率也越低,小檗胺作用于Raji细胞24h,48h,72h的IC50分别为16.01μg/ml,11.74μg/ml,9.90μg/ml。形态学观察可见,小檗胺处理24h后的Raji细胞出现了凋亡形态的改变:细胞异型性明显,胞核深染,胞质浓缩,染色质成团块状。DNA片段化检测可见经小檗胺处理的Raji细胞出现了典型的"DNA梯子”,随着药物浓度的增加,"DNA梯子”也越明显,AV-PI法检测也发现,1,2,4,8,16,24,32μg/ml小檗胺处理Raji细胞24h后,早期凋亡细胞比例分别为38.89±2.11%,41.43±3.45%,44.54±3.02%,47.09±2.69%,54.20±5.67%,57.47±6.99%,60.87±5.38%,同时,小檗胺还可以诱导Raji细胞PARP剪切激活。 综上所述,小檗胺对Raji细胞有抑制增殖和诱导凋亡作用,可能通过caspase途径诱导Raji细胞凋亡。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R733.1;R285.5

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【参考文献】
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