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《中南大学》 2011年
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强的松对土三七致肝小静脉闭塞病小鼠肝脏IL-6、IL-8、HSP-70表达的影响

路永媚  
【摘要】:背景:肝小静脉闭塞病(hepatic veno-occlusive disease, VOD/HVOD)在组织学上以肝小静脉的非血栓性闭塞为特征,以肝肿大、右上腹疼痛、黄疸和腹水为主要临床表现。三七有散瘀止痛、补气摄血的功效,常用于治疗跌打损伤、创伤出血、吐血、产后血气痛等疾病。而研究发现土三七有肝毒性,土三七可导致HVOD的原因可能和土三七含有吡咯烷生物碱(pyrrolizidine, PAs)有关,其致病机制尚未完全明确。文献报道许多细胞因子参与了HVOD肝纤维化的发展,例如ⅠL-6、IL-8、HSP-70等。强的松又名去氢可的松、泼尼松、醋酸泼尼松,是肾上腺皮质激素及促肾上腺皮质激素类药物,具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制作用,强的松治疗HVOD有效可能是抑制一些细胞因子的表达,例如IL-6、IL-8、HSP-70等,强的松是否通过抑制这些细胞因子的表达来阻止HVOD的进展尚无文献报道,本课题将用免疫组化的方法检测土三七建立HVOD小鼠模型肝脏的IL-6、IL-8和HSP-70的表达,探讨强的松是否通过抑制IL-6、IL-8和HSP-70的表达来阻止HVOD的发生、发展。 方法:将本课题组先前完成的小鼠灌胃建立土三七致肝小静脉闭塞病的稳定动物模型,通过免疫组织化学方法对试验动物肝脏及强的松干预组的试验动物肝脏行IL-6、IL-8、HSP-70检测。动物模型建立:115只小鼠随机分为4组,土三七组30只(100g土三七熬成药液,相当于生药1g/mL,每只小鼠按30ml/kg/d予0.6ml灌胃,30天后处理),空白对照组25只(PBS缓冲液30ml/kg/d,每只小鼠予0.6ml灌胃,30天后处理),强的松干预1组30只(强的松片溶于PBS稀释成1mg/ml,每只小鼠按5 mg/kg/d每次给0.1ml灌胃,与土三七30 ml/kg/d同时灌胃,30天后处理),强的松干预2组30只(强的松片溶于PBS稀释成1 mg/mL,每只小鼠按10 mg/kg/d每次给0.2ml灌胃,与土三七30 ml/kh/d同时灌胃,30天后处理)。利用土三七煎液,对小鼠灌胃建立土三七致肝小静脉闭塞病的稳定动物模型。本实验留取动物模型的肝脏组织制作病理切片,并通过二步法免疫组织化学方法对小鼠肝小静脉闭塞病动物模型及强的松干预组的试验动物肝脏行IL-6、IL-8、HSP-70检测,数据应用SPSS13.0软件包进行统计分析。 结果:土三七组小鼠动物模型符合HVOD表现,光镜下观察土三七组小鼠动物模型肝脏标本,病理特征也符合肝小静脉闭塞病的病理特点。免疫组化检测结果:土三七动物模型组小鼠的肝组织中IL-6、HSP-70的水平明显高于空白对照(30.99±14.49vs93.42±9.25,29.62±1.91vs140.00±12.68 P0.01),在强的松干预1组及2组,IL-6、HSP-70的水平不升高,且不同剂量干预组之间无明显差异(P0.05),而IL-8的水平在PBS空白对照组中为最高。 结论:本实验利用已建立的土三七煎液灌胃诱导小鼠HVOD模型,通过免疫组化检测,对各组小鼠肝脏IL-6、IL-8和HSP-70免疫组化检测比较,模型组小鼠IL-6、HSP-70的表达是明显增高,提示IL-6、HSP-70可能参与了HVOD的发病。IL-8的表达检测结果与四组比较无明显变化,提示IL-8可能不参与HVOD的发生与发展,但有待进一步证实。强的松干预组(1、2组)的IL-6和HSP-70的表达和空白对照组无明显差异,是否提示强的松治疗早期HVOD有效,与通过抑制IL-6和HSP-70的表达有关,是否参加阻止HVOD的发生、发展,其机制有待进一步研究。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R965

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【参考文献】
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