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《中南大学》 2011年
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14-3-3σ基因在香烟烟雾提取物诱导A549细胞迁移中的作用

邓荃文  
【摘要】:目的探讨香烟烟雾提取物(Cigarette smoking extract,CSE)诱导A549细胞中14-3-3σ表达水平与细胞转移迁移能力的关系;并初步探讨香烟烟雾提取物导致A549细胞中14-3-3σ表达下降的机制中是否存在DNA甲基化。 方法我们用香烟烟雾提取物长期处A549细胞(16周)以模拟肺癌患者继续吸烟状态(Current Smoking,CS),处理16周后换用不含香烟烟雾提取物的普通培养基继续培养8周以模拟肺癌患者戒烟状态(Ex-Smoking,ES),同时一直用普通培养基培养的A549细胞以模拟不吸烟的肺癌状态(Non-Smoking, NS)作为对照组。通过RT-PCR检测各组细胞中14-3-3σ的mRNA表达水平后转染不同质粒,再次通过RT-PCR.Western-blot检测14-3-36表达水平,通过Transwell.划痕试验检测细胞转移迁移能力;通过Methylmion Specific PCR (MSP)检测细胞中14-3-3σ甲基化情况。 结果CS. ES组中14-3-3σ的mRNA表达较NS组中表达下降而CS、ES组间无明显差异;CS.ES组转染14-3-3σ质粒后14-3-3σ表达明显升高、细胞转移迁移能力降低,而转染空质粒后14-3-3σ表达无明显差异、细胞转移迁移能力较前亦无明显差异;NS.CS和ES组中14-3-3σ均存在不完全甲基化,但CS.ES组中甲基化程度较NS组明显增强,而CS、ES组间则无明显差异。 结论1.香烟烟雾提取物处理A549细胞后,细胞转移迁移能力增加与14-3-3σ表达下降密切相关。2.香烟烟雾提取物处理A549细胞后14-3-3σ表达下降的机制中存在DNA甲基化。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R734.2

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