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《中南大学》 2012年
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白芍总苷对系统性红斑狼疮CD4~+CD25~+调节性T细胞作用及其机制研究

汤媚妮  
【摘要】:第一部分TGP对系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞中CD4+CD25+T调节细胞及相关细胞因子影响 目的:研究白芍总苷(Total glucosides of Paeony,TGP)对系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus,SLE)外周血CD4+CD25+T调节细胞(Treg细胞)数量,相关细胞因子mRNA及蛋白表达水平的影响,探讨TGP治疗SLE的作用机制。 方法:免疫磁珠法分离病例组及对照组外周血CD4+T细胞,使用空白、低、中、高浓度(0,62.5,312.5,1562.5μg/m1)TGP刺激培养后,流式细胞术检测Treg细胞数量,提取总RNA,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞因子mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测病例高浓度组培养液上清中细胞因子TGF-β1,IL-2及IFN-7水平。 结果:1.高浓度TGP干预SLE组Treg细胞数量较空白对照组显著上调(p0.01),中、低浓度组无显著差异(p0.05);健康对照各浓度组间无显著差异(p0.05)。 2.高浓度TGP干预SLE组IL-2及IFN-ymRNA (p0.01, p0.05)及蛋白(p0.01)表达较空白对照组显著上调,而低、中浓度组无显著改变(p0.05),TGF-p1的1mRNA水平各浓度组较空白对照组无显著差异(p0.05);健康对照各浓度组mRNA水平较空白对照组均无显著差异(p0.05)。 结论:TGP通过上调细胞因子IFN-γ及IL-2诱导生成Treg细胞,可能为其有效治疗SLE的机制之一 第二部分TGP对系统性红斑狼疮患者CD4+T细胞Foxp3表达的影响及机制 目的:研究TGP对Foxp3mRNA及蛋白表达及Foxp3基因启动子区域甲基化水平的调控,从而探讨TGP治疗SLE的表观遗传机制。 方法:免疫磁珠法分离SLE组及对照组外周血CD4+T细胞,使用空白、低、中、高浓度(0,62.5,312.5,1562.51μg/m1)TGP刺激培养后,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Foxp3mRNA表达,Western-blotting检测Foxp3基因蛋白表达,重亚硫酸盐测序(BSP)检测Foxp3基因启动子区域甲基化水平。 结果:1.高浓度TGP干预SLE组Foxp3mRNA表达较空白对照组显著上调(p0.01),且干预48小时效果最明显(p0.01),而低(62.5μg/m1)、中(312.5μg/m1)浓度组反而下降(p0.01) 2.高浓度TGP干预SLE组Foxp3蛋白表达较空白对照组明显增加(p0.01),低、中浓度组无显著改变(p0.05) 3.SLE空白对照组Foxp3基因启动子区域CpGs (-18,-33,-40,-52,-88,-101,-113and-139bp)相对健康空白对照组处于高甲基化水平,SLE三个浓度组甲基化水平均下调(p0.01),且高浓度组最显著;健康对照组四组浓度间甲基化水平差异无统计学意义(P0.05)。 结论:TGP通过降低Foxp3基因启动子区域甲基化水平促进Foxp3的表达
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R593.241

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