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《中南大学》 2011年
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MYH9在结肠癌中的表达及其生物学意义

陈勇  
【摘要】:研究目的:结肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制仍不十分明了,深入研究结肠癌的发病机制,对疾病的早期诊断,治疗和改善患者生活质量有着十分重要的意义,MYH9可能参与了结肠癌的发生和发展,但其作用机制尚不明确。 研究方法:通过对60例散发的结肠癌患者的临床资料收集,收集其年龄,性别,肿瘤原发部位,肿瘤分期,肿瘤大小,组织学类型,分化程度等临床资料以及手术标本。使用real-Time PCR方法检测各肿瘤标本和正常对照组织中的MYH9mRNA表达,通过western blot检测各肿瘤标本中MYH9蛋白表达,并与患者的临床病例资料进行统计学分析。 同时根据人MYH9的mRNA序列选择2个靶序列并根据它们设计合成2对寡核苷酸序列,构建了人MYH9基因的RNAi质粒载体,使用293FT细胞,包装产生病毒颗粒。并感染HCT-8和SW480结肠癌细胞系,运用Real-time PCR和western blot技术检测病毒干扰的效果。对MYH9干扰成功的HCT-8和SW480细胞系,进行细胞生长,细胞增殖,细胞迁移能力的检测。 研究结果:MYH9mRNA和蛋白在正常组织和结肠癌组织中都有表达。60例结肠癌患者的临床资料显示,结肠癌组织MYH9mRNA表达量与正常组织相比p0.0001,具有统计学差异。与蛋白质表达量与正常组织相比p=0.0313,免疫组织化学结果显示,MYH9在结肠癌组织的表达量显著高于正常对照组。与近端结肠的肿瘤相比较,远端结肠肿瘤组织的MYH9的表达量高于近端结肠,差异具有统计学意义,P=0.01001,而正常对照组织MYH9的表达量没有显著差别。发生了转移的肿瘤组织(Ⅲ期和Ⅳ期)MYH9的表达量也显著高于未发生转移的肿瘤组织(Ⅰ期和Ⅱ期),P=0.0008。 为了深入探讨MYH9在肿瘤发展过程中可能的作用,我们获得了2种pRNA-U6/Lenti慢病毒载体,产生获得了高滴度的慢病毒载体颗粒;慢病毒感染结肠癌细胞HCT-8和SW480细胞系后,pRNA-U6.2/Lenti-1和pRNA-U6.2/Lenti-2都能显著地抑制MYH9mRNA水平及蛋白水平的表达,阴性对照病毒pRNA-U6.2/Lenti-control对MYH9mRNA水平及蛋白水平无明显影响。在对干扰了MYH9基因的结肠癌细胞分析后,结果显示HCT-8和SW480的生长增殖受到抑制,同时平均细胞迁移数相比对照组显著减少。 结论: 1.结肠癌中MYH9表达量高,而正常组织表达量低。 2.结肠癌组织中表达MYH9与肿瘤的原发部位和分期显著相关,提示MYH9可能在结结肠癌的浸转移过程中发挥一定的作用。 3.干扰MYH9能减慢结肠癌细胞的生长和增殖,降低结肠癌细胞的迁移能力。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R735.35

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