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《中南大学》 2013年
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Tiam1调控喉癌生长及侵袭转移的体内外实验研究

王爽  
【摘要】:第一章Tiam1在喉癌中的表达及其临床意义 目的:检测T淋巴细胞侵袭转移诱导因子1(Tiam1)蛋白在喉癌组织中的表达,并探讨其表达水平与喉癌临床病理特征和预后之间的关系。 方法:采用免疫组织化学染色技术检测Tiam1蛋白在98例喉癌石蜡组织切片中的表达,并统计分析Tiam1蛋白表达水平与喉癌临床病理特征和预后之间的关系;另外,运用Western blot检测Tiam1蛋白在12例配对的喉癌组织及癌旁黏膜组织中的表达。 结果:Tiam1蛋白的表达与喉癌的淋巴结转移(P0.001)、临床分期(Ⅰ期+Ⅱ期/Ⅲ期+Ⅳ期)(P=0.027)、组织病理学分级(P=0.020)及复发(P=0.003)密切相关;Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示Tiam1高表达组的5年无复发生存率(P=0.001)和5年总生存率(P0.001)均明显低于Tiam1低表达组;而且通过Kaplan-Meier生存曲线分析Tiam1蛋白表达和淋巴结转移情况与头颈鳞癌患者预后之间的关系,发现Tiam1高表达并有淋巴结转移组的5年无复发生存率和5年总生存率明显低于其它(Tiam1低表达或无淋巴结转移)组(P均0.001);多因素Cox比例风险回归模型进一步显示,淋巴结转移(P=0.001)及Tiam1表达水平(P=0.020)为喉癌的独立预后因素。Western blot结果显示Tiam1蛋白在喉癌组织中的表达水平均高于癌旁黏膜组织(P0.001)。 结论:Tiam1在喉癌组织中表达显著升高,且其高表达与喉癌患者的淋巴结转移、复发及预后密切相关。Tiam1可能在喉癌的发生、发展中起重要作用,其表达水平对喉癌的复发及预后具有评估价值。 第二章Tiam1调控喉癌细胞增殖及侵袭转移的体外实验研究 目的:我们前期的研究表明Tiam1蛋白在喉癌组织中有表达,并与患者的临床分期、淋巴结转移、复发及预后密切相关。因此,该部分将上调Tiam1在喉癌细胞株中的表达,并观察Tiam1基因表达上调后对喉癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力等生物学行为的影响。 方法:利用Tiam1/C1199质粒转染喉癌Hep-2细胞,G418筛选Tiam1基因稳定高表达的人喉癌Hep-2细胞,Western blot、细胞免疫荧光及细胞免疫组化检测转染效果;通过MTT、平板克隆形成实验、流式细胞术、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验观察Tiam1过表达后对Hep-2细胞的体外增殖能力、迁移及侵袭能力的影响。 结果:Tiam1/C1199质粒成功转染入Hep-2细胞,G418筛选后成功构建出Tiam1稳定高表达的Hep-2细胞(Hep-2/Tiam1)。与对照组Hep-2及转染空载体的Hep-2细胞(Hep-2/Mock)比较,各组之间细胞的增殖能力无明显差异(P0.05),处于G1期、S期和G2期的细胞比率亦无明显统计学差异(P0.05),而Hep-2/Tiam1的凋亡率与Hep-2及Hep-2/Mock相比则有明显下降(2.50±1.33vs.5.61±1.08,5.83±1.02)(P=0.021)。划痕48小时后Hep-2/Tiaml细胞的迁移距离明显多于Hep-2及Hep-2/Mock (147.00±26.06vs.83.33±23.18,96.33±16.01)(P=0.028)。Transwell侵袭实验发现24小时后穿过Transwell聚碳酸酯膜的Hep-2/Tiam1细胞较两对照组明显增多(68.33±6.66vs.43.00±8.89,45.00±7.55)(P=0.013)。 结论:Tiam1过表达后对喉癌Hep-2细胞的体外增殖能力无明显影响,但能增强Hep-2细胞的迁移及侵袭能力,提示其在喉癌的进展中发挥了重要作用。 第三章Tiaml调控喉癌细胞增殖的体内实验研究 目的:进一步从体内实验来证实Tiaml在组织及细胞水平的实验结果。 方法:利用Tiam1/C1199质粒转染喉癌Hep-2细胞,G418筛选Tiaml基因稳定高表达的人喉癌Hep-2细胞,Western blot检测转染效果;构建喉癌裸鼠移植瘤动物模型,通过HE染色验证其成瘤情况;免疫组织化学及Western blot技术检测移植瘤标本中Tiam1的表达情况。 结果:筛选出Tiam1基因稳定过表达的Hep-2细胞,并成功构建喉癌裸鼠移植瘤动物模型,成瘤率达100%。HE染色符合Hep-2细胞移植瘤的特点。实验组Hep-2/Tiaml细胞移植瘤体积与对照组Hep-2及Hep-2/Mock细胞相比无明显统计学差异(P0.05)。实验组Hep-2/Tiam1细胞移植瘤重量与对照组Hep-2及Hep-2/Mock细胞相比亦无明显统计学差异(P0.05)。免疫组织化学及Western blot技术检测均显示实验组移植瘤组织中Tiam1蛋白表达显著增加(P0.05)。 结论:Tiam1过表达对喉癌细胞在动物体内的生长无明显影响。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R739.65

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