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《中南大学》 2014年
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人和小鼠神经元细胞核RNA的分离与制备

蒙庆团  
【摘要】:人脑组织主要是由神经元和胶质细胞组成。神经元是神经系统基本的结构和功能单位。神经元在细胞水平和分子水平的变异与多种神经系统疾病的发生有显著关联。多项研究表明神经元细胞特异性基因表达的异常与神经精神疾病和神经退行性疾病的发生有重要联系。然而神经系统疾病的致病机制仍未十分清楚,需要人们更为深入的研究。利用人冻存脑组织获取神经元细胞特异性表达谱不仅有助于深入了解神经元特异性基因的表达情况,还对神经系统疾病的致病机制研究有巨大的推动作用。实验证明,细胞核可作为mRNA的良好来源,且不会影响总体的基因差异性表达分析。本实验将以人冻存脑组织样本和小鼠脑组织为研究对象,分离提取神经元细胞核,获取神经元细胞核RNA,并在今后的实验中利用基因表达芯片和RNA测序等方法绘制神经元特异性基因表达谱。 目的: 建立人和小鼠神经元细胞核RNA分离和制备技术平台。 方法: 1.将脑组织在细胞裂解液下研磨,制成细胞核悬液。 2.采用蔗糖密度梯度离心的方法获取纯和的脑组织细胞核; 3.利用荧光标记的NeuN抗体特异性的标记神经元细胞核,再通过流式细胞分选的方法分离提取神经元细胞核; 4.离心收集分选后的神经元细胞核,并利用Trizol法和RNA提取试剂盒提取神经元细胞核RNA; 5.利用Agilent2100bioanalyzer对细胞核RNA进行质量分析。 结果: 1.我们利用流式细胞分选法可以从人和小鼠脑组织中获取纯化的神经元细胞核,在整个实验流程中细胞核形态保持完整。 2.成功从分选的神经元细胞核中提取细胞核RNA。 3.获取了人脑不同区域神经元细胞比例数据,发现不同个体和不同脑区的神经元细胞比例不同。 4.RNA2100分析结果显示,新鲜小鼠脑组织RNA的RIN值均大于7.5,而人冻存脑组织及细胞核RNA的RIN值较低,这提示RNA2100分析的评判标准不适用于细胞核RNA的质量检测。 结论: 1.我们成功建立了人和小鼠神经元细胞核RNA分离提取技术平台; 2.目前RNA2100分析的评判标准不适用于细胞核RNA的质量检测。 3.人大脑不同区域神经元细胞的比例不同。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:Q421

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【共引文献】
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1 Tianzhi Huang;Angel Alvarez;Bo Hu;Shi-Yuan Cheng;;Noncoding RNAs in cancer and cancer stem cells[J];Chinese Journal of Cancer;2013年11期
2 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期
3 李业;罗朝辉;杨欢;;长链非编码RNA的生物学功能及在神经系统疾病中的作用[J];国际神经病学神经外科学杂志;2013年Z1期
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6 叶宸;赵倩;孙宁霞;李文;;长链非编码RNA在妇科恶性肿瘤中的研究进展[J];发育医学电子杂志;2014年02期
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8 朱金龙;李转见;;lncRNA在畜禽遗传育种中的研究进展及应用展望[J];安徽农业科学;2014年29期
9 宿娅;张晨芳;魏强;李广林;;长链非编码RNA研究进展[J];西北植物学报;2014年11期
10 韩涛;郭宏骞;;长链非编码RNA与前列腺癌的研究进展[J];临床泌尿外科杂志;2013年06期
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