B7修饰的U14细胞疫苗和HPV16E6/B7重组基因疫苗预防及治疗宫颈癌实验研究

【摘要】： 宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤。研究证明人类乳头瘤病毒是其致病因子，由于其表达病毒蛋白因而具有较强的抗原性，病毒致瘤的肿瘤免疫原性最强。因此，宫颈癌是最适用于免疫治疗的妇科肿瘤之一。研究发现共刺激分子B7的缺陷是肿瘤细胞抗原不能有效提呈至T细胞，从而逃避机体免疫反应的重要原因。B7分子既能给肿瘤抗原的提呈提供重要的第二信号，也能促进基因疫苗的效果。 基因疫苗以其特殊的抗原提呈方式有利于打破肿瘤的免疫耐受。人乳头瘤病毒早期基因E6、E7是宫颈癌变的关键因子，具有抗原性和识别人T细胞编码的抗原表位，是宫颈癌免疫治疗最富吸引力的靶分子。有研究证明B7能增强CEA及β-半乳糖苷酶DNA疫苗的效果。 目前国内外尚缺乏可供评价HPV免疫治疗的宫颈癌动物模型。我国于1987年建立了一个重要的小鼠宫颈癌双向转移模型。以此为基础，建立表达HPV的小鼠宫颈癌模型将对以HPV为靶的免疫治疗研究提供重要的研究工具。 为了探讨B7修饰的U14细胞疫苗及HPV16 E6／B7复合型基因疫苗能否有效预防及治疗宫颈癌，为开发研究宫颈癌的生物治疗新方法奠定基础，因此本研究进行了如下的尝试。 目的：制备B7修饰的U14细胞疫苗，观察其在同系小鼠体内预防和治疗宫颈癌的效果；构建HPV16 E6、E7阳性的小鼠宫颈癌U14，并移植同系小鼠观察其生长特性和转移规律，建立HPV16 E6、E7阳性的小鼠宫颈癌动物模型；构建HPV16 E6／E7复合型重组基因疫苗，观察其在动物模型中预防和治疗宫颈癌的效果。 方法：将B7基因转染U14，筛选鉴定稳定转染B7的U14(即B7~+U14)，制备成细胞疫苗，分别预防和治疗宫颈癌模型小鼠，观察出瘤时间、小鼠生存期、体外检测经B7~+U14疫苗免疫后小鼠T细胞杀伤小鼠宫颈癌的效果；将HPV16E6、E7导入U14，筛选、鉴定稳定转染细胞(即E6~+U14、E7~+U14)，将 中南大学博士学位论文 中文摘要 其移植同系小鼠，观察其生长特性和转移规律；构建 HPV 6E6与 B7嵌合型重 组真核表达框架，制备 HPV 6E6／E7复合型 DNA疫苗，分别预防及治疗 HPV 6E6 阳性的模型小鼠。 结果：B7勺14的细胞疫苗可有效预防野生型＊ 细胞移植瘤的产生，可治 愈部分荷瘤小鼠。但其效果受荷瘤大小的限制，即肿瘤直径＞3mm时，疫苗治 疗无效。体外检测经B7＋U14细胞疫苗免疫的小鼠T淋巴细胞具有较高的杀伤肿 瘤细胞活性；建立转染HPV16E6、E7的U14细胞，移植同系小鼠后显示出了与 野生型不同的生长特性和转移规律；构建了HPV 6E6／B7嵌合型重组DNA疫苗， HPV16E6及 HPV16E6／B7 DNA疫苗能有效预防 E6”U14移植瘤的产生，其预防 效果后者优于前者，可治疗部分荷瘤小鼠，治疗效果二者无差别。 结论：l．转染B7基因的U14细胞疫苗能诱导机体产生有效的抗宫颈癌主动 免疫应答，能有效预防移植成瘤，治疗部分荷瘤小鼠，但其效果受荷瘤大小的 限制，即肿瘤直径＞3nun时无效，提示该疫苗可能成为临床术后治疗宫颈癌的辅 助方法； 2．建立了转染HPV16E6、E7的小鼠宫颈癌U14移植同系小鼠模型，该模型 仍然保持淋巴及血道双向转移特性，为研究以E6、E7为靶的免疫或其他方法治 疗宫颈癌提供了有价值的动物模型； 3．HPV16E6／B7复合型重组洲A疫苗能诱导机体产生针对 HPV16E6阳性的宫 颈癌主动免疫应答，其预防成瘤的效果较HPV 6E6DNA疫苗好，可治疗部分荷 瘤小鼠，但二者效果无差别，提示该疫苗可能成为临床治疗宫颈癌的有效方法。

【关键词】：宫颈癌 U14 基因 B7 基因转染 HPV DNA疫苗 T细胞杀伤试验 615小鼠 疾病模型
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R737.33
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