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《中南大学》 2003年
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氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的信号传导通路的研究

杨建青  
【摘要】: 细胞凋亡是一种程序性、生理性和主动性细胞死亡方式,因有与坏死明显不同的形态学特征及生化改变而命名。在所有多细胞生物体的发育及稳态维护方面起了重要作用,通过凋亡,生物体能祛除过剩、有害和衰老的细胞,维持机体正常的细胞数量和结构。人体中,过度凋亡或凋亡不足均能导致严重后果。有遗传病变的细胞不能发生凋亡促成了肿瘤的发生,现已明确肿瘤的发生发展不仅与肿瘤的高增殖性有关,而且与肿瘤细胞的凋亡机制障碍、凋亡耐受关系更密切。细胞凋亡通路中关键基因的突变使肿瘤细胞可在没有生长刺激信号的情况下疯长,并能逃避宿主免疫反应。而且,逃避凋亡的能力也使肿瘤细胞能无限制地复制,侵犯邻近和远处组织,并导致了治疗耐受。 研究发现,细胞凋亡的特征性形态学和生化改变是由半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)家族所介导。正常情况下caspase以无活性的酶原形式存在于胞浆中,细胞受凋亡刺激后可经过蛋白酶水解将其加工成活性态。活化的效应性caspase可裂解多种底物,包括酶和细胞骨架蛋白如纤层蛋白,导致细胞有序解体。目前,两条活化caspase的信号传导通路已确立和阐明,根据通路的切入点不同,分别称为死亡受体和线粒体通路。细胞凋亡可以经过外源性通路和/或内源性通路,具体取决于肿瘤细胞类型、肿瘤细胞与周边的关系以及所处的微环境等因素。 我们在前期研究中已证实氟尿嘧啶可诱导肝癌细胞凋亡,外源性信号传导通路参与了这一过程。但对氟尿嘧啶是否亦经内源性通路诱导肝癌细胞凋亡,两条通路在该肝癌细胞凋亡中的地位以及相互之间是否存在联系,目前尚不清楚。为此,本实验欲利用所建立的氟尿嘧啶体外诱导肝癌细胞凋亡的模型,通过研究caspase-9的活化及其活 性变化,分析线粒体蛋白细胞色素C和 Smac川 在线粒体和胞浆 中的分布情况,以确定氟尿唆陡是否经内源性通路诱导肝癌细胞凋 亡。同时,使用特异的启动性caspase抑制剂分别阻断内源性和外源 性通路的上游,探讨两条通路在氟尿喷陡诱导肝癌细胞凋亡中的作用 以及相互关系。本研究将为建立化疗诱导肝癌细胞凋亡的信号传导通 路图奠定基础,并有助于了解化疗作用以及化疗耐受的确切分子机 制,还将为优化化疗方案、改善化疗疗效、克服化疗耐药和寻找新的 肿瘤治疗靶点和策略提供实验和理论依据。 本实验分为两部分,第一部分:氟尿喷陡诱导肝癌细胞凋亡的内 源性信号传导通路的研究;第二部分:内、外源性信导通路在氟尿啼 陡诱导肝癌细胞凋亡中的作用。 第一部分 氟尿啼睫诱导肝癌细胞凋亡的内源性 凋亡信号传导通路的研究 目的 检测氟尿啼睫团uorouracil,5Iu)诱导肝癌细胞凋亡过程 中caspase个的活化及其活性变化,分析线粒体蛋白细胞色素C和 Smaco 在线粒体和胞浆中的分布情况,以确定氟尿喀陡是否经 内源性通路诱导肝癌细胞凋亡。 方法 用 IX 10一、 的氟尿嚼徒处理 HepGZ细胞,分别作用 2、 4、8、16、24 J\时,用荧光检测试剂盒测定 HePGZ细胞凋亡过程中 caspase-9的活性变化,Western-blot检狈 caspase-9前体蛋白酶水 解裂解活化后产生的小亚单位片段b10);Western十 和间接免 疫荧光法分析细胞色素C和 Smac川 蛋白在细胞中的分布情况; 流式细胞仪检测加入caspase刁抑制剂后细胞凋亡百分率的变化。 结果 氟尿唆陡处理肝癌细胞4.J\时后,caspase个活性开始升 高,于16 小时后达到高峰,与空白对照组比较差异有显著性 仰0.01):同样,在药物处理4 ’J’时后,Western-blot检查发现即 且且 有caspase今前体发生蛋白酶水解裂解后所形成的10KD片段条带, 此蛋自条带随着药物作用时间的延长愈加明显,至16小时最清楚。 Western-blot分析也显示经药物处理后细胞色素 C和 Smac/DIABLO 在胞浆中的分布量从4小时后逐渐增加,相应的蛋白条带逐渐变清 晰,至 16 J\时最明显;而细胞色素C和 Smac/DIABLO在线粒体中的 分布情况却正相反,蛋白条带由4小时最清楚,逐渐变淡,16小时 最模糊。荧光显微镜下观察到,未加药物处理的对照组肝癌细胞中荧 光呈点状或细块状分布,而药物处理的肝癌细胞从2小时开始,细胞 中荧光逐渐变得越来越弥散,表明细胞色素 C和 Smac心 由局限 于线粒体变成均匀分布于整个胞浆。使用caspase叫抑制剂后,肝癌 细胞凋亡百分率明显下降,抑制剂组与氟尿唆陡组比较,差异有显著 性k的.05),但抑制剂组16小时仍显著高于空白对照组km.05) 结论 在氟尿啼陡诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase今被活化, 活性显著升高;细胞色素C和 Smaco 自线粒体释放到胞浆,参 与了caspase-9的活化;caspase-9抑制剂可部分阻断氟尿嚼陡诱导 肝癌细胞凋亡。结果提示氟尿唆陡诱导肝癌细胞凋亡经过了内源性凋 亡信号传导通路。 第二部分 内、外源性信导通路在氟尿啼睫诱导 肝癌细胞凋亡中的作用 目的 探讨氟尿啼陡诱导HepGZ细
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R735.7

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【引证文献】
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1 樊占兵;李明;魏双江;秦彩娟;肖庆旺;;黄芪注射液对荷结肠癌小鼠免疫功能低下的正向调节作用研究[J];临床和实验医学杂志;2012年07期
【参考文献】
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1 杨建青;杨连粤;祝和成;;丝裂霉素诱导人肝癌细胞凋亡[J];世界华人消化杂志;2001年03期
2 杨连粤,易彤波,吕军,杨建青;Caspase-8、caspase-3在5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡中的作用[J];中华肝脏病杂志;2003年05期
【共引文献】
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1 黄礼年,陈余清,宋玮,承泽农,王朝夫,刘超;米诺环素抑制小鼠肺癌生长、转移及抗血管生成的研究[J];蚌埠医学院学报;2005年03期
2 田庆,陈良安,刘又宁;人高、低转移肺大细胞癌细胞系的mRNA差异显示研究[J];中国肺癌杂志;2003年05期
3 李洋;张清富;王洋;邱雪杉;王恩华;;缺氧对肺癌细胞CCR7表达及其侵袭力的影响[J];中国肺癌杂志;2008年05期
4 黄杨卿;沈伟峰;杨甲梅;谢峰;阚彤;徐峰;;肝细胞癌肝切除术中经大网膜静脉注射丝裂霉素预防肿瘤复发疗效分析[J];肝胆外科杂志;2008年06期
5 高瀛岱,杨纯正;宿主微环境与肿瘤多药耐药和血管新生的关系[J];国外医学.药学分册;2001年01期
6 呼圣娟,郭新宁,杨力,赵进,张东涛,翟慧红,吴开春,樊代明;噬菌体多肽phage20抗胃癌肝转移作用的实验研究[J];宁夏医学杂志;2005年03期
7 夏磊;周玲;崔淑香;牟艳玲;王元书;;大蒜素诱导胃肿瘤细胞凋亡机制的探讨[J];中华肿瘤防治杂志;2010年16期
8 刘志恒;李桂霞;李新焕;孙桂明;潘改芹;;术中经大网膜静脉注入丝裂霉素对肝细胞肝癌切除术后预后影响的分析[J];中华肿瘤防治杂志;2010年22期
9 孟强;崔龙;孟荣贵;凌光烈;;国产纳米炭对丝裂霉素的吸附和解吸附性能研究[J];山东医药;2008年21期
10 陈颖,吴云林,陆丽娟,章永平;耐药胃癌裸鼠移植瘤中血管生成与耐药机制的关系[J];上海第二医科大学学报;2003年06期
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1 李楠;Sival抑制EMT及肿瘤转移的分子机制研究[D];中国科学技术大学;2011年
2 刘飞;食管癌差异表达蛋白的分离鉴定及功能研究[D];北京协和医学院;2011年
3 孙晓雁;外源性p16基因对食管癌细胞系的生长抑制作用[D];第四军医大学;2001年
4 周照华;CD40信号对恶性B细胞生物学行为的影响及其机制[D];苏州大学;2002年
5 王春雷;TGF—β1对肝细胞再生分化及凋亡的调控作用机制[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
6 惠利健;对肝癌基因表达谱和肿瘤相关剪接类型的分析[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2003年
7 王静;鞘脂与PPAR相互作用及其对癌细胞凋亡调控的影响[D];中国农业大学;2004年
8 杨作森;大肠癌中Plk1和p53过表达及二者的相关性研究[D];吉林大学;2004年
9 陈灿铭;局部晚期乳腺癌新辅助化疗的研究[D];复旦大学;2004年
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1 苏艳宾;趋化因子及其受体在重症肌无力患者胸腺组织的异常表达和作用[D];郑州大学;2011年
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3 石杰;MTX在不同癌症患者中药动学研究及个体化给药方案设计[D];青岛大学;2001年
4 田庆;一个新的肺癌转移相关基因—LCMR1的克隆,序列分析,表达谱研究及其生物学功能的初步研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
5 孙刚;咖啡因逆转骨肉瘤细胞多药耐药的研究[D];青岛大学;2004年
6 凌焱;重组人乙酰肝素酶的克隆表达及其生物学特性的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
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8 张冬红;多巴胺受体亚型D_4和癌基因c-fos在胃癌中的表达及意义[D];郑州大学;2005年
9 何保昌;p53突变及多态性与HPV相关食管癌关系的研究[D];郑州大学;2005年
10 李晴;吗啡对阿霉素诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的抑制作用[D];沈阳药科大学;2006年
【同被引文献】
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1 肖亿;;氟尿嘧啶的体外肾毒性研究[J];山西医药杂志(下半月刊);2009年05期
2 许杜娟,吴强,杨雁,陈敏珠;黄芪总苷的抑瘤作用及其作用机制[J];中国药理学通报;2003年07期
3 刘鹏熙;周瑞芳;谭敏;;黄芪注射液对basal-like型乳腺癌MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响[J];中华乳腺病杂志(电子版);2009年02期
4 白桦,戴裕光,杨国汉;中药介导的肿瘤生物学治疗进展[J];中国中西医结合杂志;1999年10期
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1 程宏;抗CD3ε单克隆抗体和5-氟尿嘧啶对T淋巴细胞凋亡的协同作用[D];中国协和医科大学;2003年
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1 王墅塾;王梓楠;赵自明;魏小勇;杜铁良;李琳琳;杨巧红;;黄芪注射液对免疫功能低下小鼠脾淋巴细胞的影响[J];动物医学进展;2014年04期
2 周涛;刘远梅;高明娟;金祝;毛羽晨;;黄芪注射液在小儿急性肠梗阻缺血再灌注肠损伤中的保护作用[J];实用儿科临床杂志;2012年19期
【二级参考文献】
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1 吕军,杨连粤,杨建青;5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase-3活性变化的研究[J];中华实验外科杂志;2000年05期
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1 曹晓伟,傅志仁,晿浩,丁国善;Cyclin D1和NF-κB在5-Fu诱导肝癌细胞凋亡过程中的表达[J];实用癌症杂志;2005年01期
2 潘德顺,陈伟强,王迪浔;McAb共刺激PBLs介导肝癌细胞凋亡与CPP32基因表达的关系[J];中国免疫学杂志;2000年08期
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4 邵成伟,王培军;肝癌细胞凋亡的研究[J];中国医学影像技术;2000年04期
5 王晨龙 ,杨洁;三氧化二砷诱导肝癌细胞凋亡的作用研究[J];山西医药杂志;2004年12期
6 吕军!410008长沙,杨连粤!410008长沙,杨建青!410008长沙;5-氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡过程中caspase-3活性变化的研究[J];中华实验外科杂志;2000年05期
7 杨连粤,易彤波;Caspase-8、caspase-3与Fas介导凋亡信号传导及其在肝癌细胞凋亡中的作用[J];中国现代医学杂志;2000年08期
8 边惠洁,陈志南,娄超;~(188)Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡与细胞周期阻断[J];第四军医大学学报;2001年16期
9 金志明,王天翔,朱上林;不同作用时间内表皮生长因子对肝癌细胞凋亡的影响[J];外科理论与实践;2001年02期
10 程卫东,徐瑞峰,赵健雄;中药诱导肝癌细胞凋亡的研究进展[J];甘肃中医;2004年04期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 杨雁;陈敏珠;;黄芪总提取物诱导肝癌细胞凋亡及其作用机理[A];第七届中国抗炎免疫药理学术会议论文摘要集[C];2000年
2 杨雁;陈敏珠;;黄芪总提物诱导肝癌细胞凋亡及其作用机理[A];第七届全国生化药理学术讨论会论文摘要集[C];2000年
3 韩丽辉;孙汶生;马春红;曹英林;张利宁;宋静;刘素侠;王晓燕;;IFN-γ对TRAIL诱导肝癌细胞凋亡的调节作用[A];山东免疫学会、山东微生物学会医学微生物学专业委员会、山东省医学会微生物学和免疫学专业委员会、山东省医药生物技术学会2001年学术年会论文汇编[C];2001年
4 齐润姿;安华章;于益芝;张明徽;刘书逊;徐红梅;曹雪涛;;Notch1和TRAIL对肝癌细胞凋亡的影响及作用机制的研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
5 周慧明;陈智;;肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的实验研究[A];第十二次全国中西医结合肝病学术会议论文汇编[C];2003年
6 张倜;王绍山;王希路;洪立;齐清会;;三氧化二砷诱导大鼠肝癌细胞凋亡及其与细胞周期的关系[A];第七届全国中西医结合普通外科临床及基础研究学术会议论文汇编[C];2001年
7 王绍山;张倜;洪立;王希路;齐清会;;三氧化二砷作用下大鼠肝癌细胞凋亡与PCNA表达的变化[A];第七届全国中西医结合普通外科临床及基础研究学术会议论文汇编[C];2001年
8 王运刚;施兴江;石东文;施楠;;肝癌的细胞凋亡学研究[A];中国病理生理学会中专教育委员会会议论文集[C];2003年
9 谢华红;刘杰;樊代明;;环氧合酶-2选择性抑制剂——肝癌治疗的新观念[A];科技、工程与经济社会协调发展——中国科协第五届青年学术年会论文集[C];2004年
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1 史凤芝;刘连新揭示砒霜诱导肝癌细胞凋亡机理[N];科技日报;2000年
2 史凤芝;毒药砒霜有望挑战“癌中之王”[N];光明日报;2000年
3 朱恒顺;山大一项免疫学成果通过鉴定[N];科技日报;2002年
4 史凤芝 陈英云;砒霜可能成为治疗肝癌良药[N];民族医药报;2000年
5 史凤芝 陈英云;砒霜可诱导肝癌细胞“自杀”[N];大众卫生报;2000年
6 高国起;鲁破解肝脏肿瘤切缘难题[N];中国医药报;2003年
7 ;口服去氧氟尿苷后检测肝癌组织中氟尿嘧啶的临床意义[N];中国医药报;2003年
8 刘道安;药物治疗肝癌研究取得成果[N];中国中医药报;2002年
9 贾玉容;Survivin蛋白促进肝癌细胞快速增生[N];中国医药报;2004年
10 刘道安;联合用药治疗肝癌[N];中国医药报;2002年
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1 周怡;GSN抑制肝癌细胞凋亡并促进肝癌细胞浸润转移的研究[D];广西医科大学;2014年
2 杨连君;bcl-2和bax对肝癌细胞凋亡的调控及肝癌凋亡相关单克隆抗体初步研究[D];第四军医大学;2001年
3 杨建青;氟尿嘧啶诱导肝癌细胞凋亡的信号传导通路的研究[D];中南大学;2003年
4 闫歌;RNA干扰沉寂survivin表达及其对肝癌细胞凋亡和相关信号传导通路的影响[D];重庆医科大学;2004年
5 沈宏伟;DcR3基因扩增和表达与肝癌细胞凋亡、化疗抗性关系的实验研究[D];浙江大学;2002年
6 韩克起;蟾毒灵诱导肝癌细胞凋亡及相关机理研究[D];第二军医大学;2004年
7 成胜权;Survivin基因对人肝癌细胞增殖和凋亡作用机制的研究[D];第四军医大学;2004年
8 陈军;人Fas Ligand cDNA的克隆、表达对HepC_2细胞系细胞凋亡影响[D];中南大学;2003年
9 潘金飞;survivin mRNA表达与肝癌细胞凋亡和增殖及其临床病理关系的实验研究[D];浙江大学;2003年
10 张晨;蜂毒素的鉴定及抗肝癌实验研究[D];第二军医大学;2004年
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1 彭迎霞;RN181基因表达影响SMMC7721肝癌细胞凋亡的机制研究[D];南方医科大学;2014年
2 樊菁;特异性环氧化酶-2抑制剂塞莱西布体外诱导肝癌细胞凋亡及其化疗协同作用[D];第四军医大学;2004年
3 黄华;Tuftsin促进肝癌细胞凋亡的实验研究[D];江西医学院;2000年
4 周慧明;肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的实验研究[D];浙江大学;2003年
5 王芳;Survivin在ATRA诱导的肝癌细胞凋亡中作用的研究[D];大连医科大学;2004年
6 娄超;188Re标记人肝癌单抗片断HAb18F(ab')2在荷肝癌裸鼠体内的药代动力学及188Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡的研究[D];第四军医大学;2001年
7 张宇红;核因子κB在阿霉素诱导肝癌细胞凋亡中作用的实验研究[D];第四军医大学;2004年
8 刘宁波;celecoxib诱导肝癌细胞凋亡及其相关分子机制的实验研究[D];南京医科大学;2004年
9 陈慧菁;bcl-2和bax在一氧化氮诱导人肝癌细胞凋亡中的作用[D];福建医科大学;2003年
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