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《中南大学》 2003年
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热休克预处理抑制缺血—再灌注所致心肌细胞凋亡的机制研究

石永忠  
【摘要】: 目的:心肌细胞凋亡在心肌缺血-再灌注损伤中发挥重要作用。热休克预处理通过诱导热休克蛋白(HSPs)的表达而对各种损伤发挥保护作用。本课题从线粒体信号通路及膜死亡受体信号通路探讨缺血-再灌注导致心肌细胞凋亡发生的机制,并探讨热休克预处理抑制缺血-再灌注所致心肌细胞凋亡的分子机理。 方法:采用结扎左冠状动脉30分钟再灌注不同时间制备在体小鼠心缺血-再灌注损伤(I/R)模型;将过氧化氢(0.5mmol/L)加入新生大鼠心肌细胞培养基制备心肌细胞氧化损伤模型,经DNA ladder检测,Hoechst荧光染色观察细胞凋亡的发生,Caspase活性检测试剂盒及Western-blot观察Caspase-3,8,9的活化,免疫荧光及细胞成分分离后Western blot检测Smac从线粒体的释放。为探讨热休克预处理对心肌细胞凋亡的影响及其机制,整体小鼠经42℃,15分钟热休克并恢复24小时后进行上述实验,新生大鼠心肌细胞经42℃,1小时热休克并恢复12小时后进行上述实验。 结果:缺血-再灌注可导致心肌细胞凋亡及心肌组织Caspase-3,8,9活化;热休克预处理诱导心肌组织中多种HSPs表达增加,抑制心肌细胞凋亡及Caspase-3,8,9的活化;热休克预处理诱导新生鼠心肌细胞中HSP70、HSP90及αB-晶状体蛋白表达增多,抑制H_2O_2(0.5mmol/L)诱导的心肌细胞凋亡及Caspase-3,9活化,并抑制Smac从线粒体的释放。 结论:(1)缺血-再灌注及活性氧损伤可导致心肌细胞凋亡发生;(2)膜死亡受体信号通路和线粒体信号通路在缺血-再灌注及活性氧所致的心肌细胞凋亡发生中发挥重要作用;(3)热休克预处理可诱导多种HSPs的表达,抑制膜死亡受体信号通路和线粒体信号通路的活化,抑制Smac从线粒体释放,从而抑制心肌细胞凋亡的发生。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R363

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