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《中南大学》 2005年
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宫颈癌PEI-磁性纳米粒E1A基因放化疗增敏及其相关作用机制的实验研究

申良方  
【摘要】:目的 探讨PEI-Fe_3O_4纳米粒基因载体的转运活性、E1A基因对人宫颈癌细胞生长的抑制作用和对放化疗的增敏作用及其相关的作用机制,为宫颈癌E1A基因治疗的可行性提供实验依据。 方法 ①E1A基因经PEI-Fe_3O_4纳米粒介导转染人宫颈癌细胞(Hela细胞),通过细胞计数法测绘生长曲线、计算倍增时间和软琼脂集落形成数目,观察E1A基因对该细胞体外增殖的影响。②用顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇处理细胞,观察E1A基因对顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇等化疗药物敏感性的影响。③将未经转染的Hela细胞、转染空载体纳米粒的Hela细胞(Hela-vect)及转染E1A基因的Hela细胞(Hela-E1A),分别给予0、2、4、6、8、10Gy的6MV-X线照射,通过测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对宫颈癌细胞放射敏感性的影响。④通过裸鼠致癌实验,观察了E1A基因对裸鼠移植癌生长的抑制作用。通过模拟E1A基因治疗的裸鼠实验,观察E1A基因对裸鼠移植瘤的化疗增敏作用。⑤使用流式细胞仪测定转染前后人宫颈癌细胞DNA含量,计算机分析细胞周期。观察E1A基因对细胞周期的改变。⑥用免疫细胞化学染色检测转染前后HER-2/neu基因的表达水平,观察E1A基因对HER-2/neu基因表达的影响;采用免疫组织化学染色检测转染前后肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因的表达水平,观察E1A基因对肿瘤细胞凋亡及Survivin基因和Caspase-3基因表达的影响。 结果 ①转染E1A基因的人宫颈癌细胞生长缓慢,倍增时间延长,是Hela-vect的1.53倍,是亲本细胞Hela的1.58倍;未经转染的Hela细胞、转染空载体纳米粒的Hela细胞及转染E1A基因的Hela细胞,细胞集落形成率分别为61.48%、58.20%和13.62%,E1A基因组明显低于Hela和Hela-vect组。与Hela及Hela-vect相比,集落形成抑制率分别为77.84和76.65%。②与未经转染的和转染空载体纳米粒的Hela细胞比较,Hela-E1A对放射线的敏感性提高了3倍左右,未经转染的和转染空载体纳米粒的Hela细胞对放射线的敏感性相近。③转染E1A基因的人宫颈癌细胞(Hela-E1A)对顺铂和紫杉醇的敏感性显著增加,与Hela和Hela-vect细胞比较,Hela-E1A细胞对顺铂和紫杉醇的敏感性分别提高了10倍和15倍;对5-氟尿嘧啶的增敏作用不明显。④裸鼠致癌实验结果显示:Hela-E1A细胞
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R737.33

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【参考文献】
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【共引文献】
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