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不同肠道益生菌株治疗急性溃疡性结肠炎小鼠模型的作用及其机制

陈宏辉  
【摘要】: 目的:研究双歧杆菌和乳酸杆菌在DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠模型中的治疗作用,研究不同益生菌对DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠的作用机制及其对结肠粘膜的HSP70、GR、IL10的影响。 方法: (1)筛选有效灌肠治疗溃疡性结肠炎的功能益生菌将Balb/c小鼠随机分为8组,分别为正常对照组、模型对照组、阴性对照组、阳性对照组、DSS+CMS-H004灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlCMS-H004菌液灌肠)、DSS+CH22灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlCH22菌液灌肠)、DSS+CMS-H002灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlCMS-H002菌液灌肠)、DSS+f3-5灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlf3-5菌液灌肠),其中CMS-H004菌株和CH22菌株为肠道分离的双歧杆菌,CMS-H002菌株和f3-5菌株为肠道分离的乳酸杆菌。实验过程中每日观察小鼠进食、活动等一般情况以及体重、粪便、及粪便隐血情况,评估结肠炎严重程度,9天后各组所得结肠标本,观察各组小鼠结肠的大体改变、测量整个结肠长度,行HE染色,观察镜下结肠病理变化。 (2)双歧杆菌加重急性溃疡性结肠炎结肠粘膜损伤的机制分析将Balb/c小鼠随机分为8组,分别为正常对照组、模型对照组、阴性对照组、阳性对照组、DSS+双歧杆菌CMS-H004灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlCMS-H004菌液灌肠)、DSS+双歧杆菌CH22灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlCH22菌液灌肠)、单纯双歧杆菌CMS-H004灌肠组(1×10~9CFU/ml CMS-H004菌液灌肠)、单纯双歧杆菌CH22灌肠组(1×10~9CFU/mlCH22菌液灌肠)。实验过程中每日观察小鼠进食、活动等一般情况以及体重、粪便、及粪便隐血情况,评估结肠炎严重程度,9天后各组所得结肠标本,观察各组小鼠结肠的大体改变、测量整个结肠长度,行HE染色,观察镜下结肠病理变化,并应用免疫组化染色、RT-PCR技术、Western-blotting法检测结肠粘膜中IL-10、GR和HSP70的表达。 (3)乳酸杆菌灌肠治疗DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠模型的作用及其机制将Balb/c小鼠随机分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、阴性对照组、阳性对照组、DSS+乳酸杆菌CMS-H002灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlCMS-H002菌液灌肠)、DSS+乳酸杆菌f3-5灌肠组(DSS造模+1×10~9CFU/mlf3-5菌液灌肠)。实验过程中每日观察小鼠进食、活动等一般情况以及体重、粪便、及粪便隐血情况,评估结肠炎严重程度,9天后各组所得结肠标本,观察各组小鼠结肠的大体改变、测量整个结肠长度,行HE染色,观察镜下结肠病理变化,并应用免疫组化染色、RT-PCR技术、Western-blotting法检测结肠粘膜中IL-10、GR和HSP70的表达。 结果: (1) DSS造模过程中给予双歧杆菌(CMS-H004株及CH22株)灌肠加重小鼠的腹泻、出血和体重减轻,也能加重肠道粘膜的损伤及炎性细胞浸润,乳酸杆菌(CMS-H002株及f3-5株)灌肠可减轻小鼠的腹泻、出血和消瘦,也能减轻肠道粘膜的损伤及炎性细胞浸润。 (2) DSS造模过程中给予双歧杆菌(CMS-H004株及CH22株)灌肠加重小鼠的腹泻、出血和体重减轻,也能加重肠道粘膜的损伤及炎性细胞浸润,结肠粘膜IL-10、HSP70表达减少,GR表达正常;而单纯给予双歧杆菌灌肠小鼠,不出现结肠炎表现,与正常对照组小鼠比较体重、一般情况及肠粘膜病理检查无明显差异,结肠粘膜IL-10、HSP70、GR表达正常。 (3)乳酸杆菌(CMS-H002株及f3-5株)灌肠上调IL10、HSP70的表达。 结论: (1)双歧杆菌的某些菌株在结肠粘膜屏障功能受损的情况下,可诱导结肠粘膜HSP70、IL10表达降低,加重了UC的结肠粘膜损伤。 (2)双歧杆菌的某些菌株可能是溃疡性结肠炎的条件致病菌。 (3)乳酸杆菌对能减轻溃疡性结肠炎的结肠粘膜损伤。


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