收藏本站
《中南大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

NMDA受体激活对肺泡巨噬细胞分泌作用的影响及机制研究

尚利宏  
【摘要】: 第一章巨噬细胞NMDA受体表达及其高氧暴露的影响 目的:N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体是谷氨酸受体的重要亚型,NMDA受体(NMDAR)过度激活引起的兴奋性神经毒性是引起神经细胞损伤的最后共同通路,在多种急慢性脑损伤的发生发展中发挥重要作用。在外周非神经组织对NMDA受体的研究较少,近年来发现NMDA受体在肺脏也有较高水平的表达,但生物学意义尚不清楚。 高氧性肺损伤是新生儿救治过程中的常见并发症,严重影响新生儿的生存质量,但其发病机制尚未完全阐明。Said等首先报道NMDA可引起离体灌流肺发生高通透性肺水肿,他们进一步研究发现,在成年大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)存在NMDA受体亚型NMDAR1及NMDAR2D的表达。本室前期研究发现,持续高氧暴露可致新生大鼠肺组织谷氨酸大量释放、NMDA受体表达增强。申丽等近期研究表明,在整体水平上NMDA受体的激活具有肺毒性效应。但NMDA受体在新生大鼠和RAW264.7细胞的表达情况以及持续高氧暴露是否会引起NMDA受体表达变化还未有直接的证据。因此,本研究的目的是观察NMDA受体各亚型在成年大鼠肺泡巨噬细胞、新生大鼠肺泡巨噬细胞和RAW264.7细胞的表达以及高氧暴露条件下新生大鼠肺泡巨噬细胞NMDA受体的表达变化。 方法: 1.支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage,BAL)分离、培养成年及新生大鼠肺泡巨噬细胞。 2.免疫细胞化学技术观察在成年大鼠AM、空气暴露新生大鼠AM、高氧暴露新生大鼠AM及RAW264.7细胞上NMDAR1蛋白的表达。 3.RT-PCR法检测成年大鼠AM、空气暴露新生大鼠AM、高氧暴露新生大鼠AM及RAW264.7细胞NMDAR1 mRNA的表达。 4.Real-time PCR法检测成年大鼠AM、空气暴露新生大鼠AM、高氧暴露新生大鼠AM及RAW264.7细胞NMDAR1、NMDAR2A、NMDAR2B、NMDAR2C、NMDAR2D的mRNA表达。 结果: 1.免疫细胞化学观察到NMDAR1在4组细胞均有表达,新生大鼠AM中NMDAR1的表达明显高于成年大鼠,持续高氧暴露后新生大鼠AM中NMDAR1的表达进一步增强,RAW264.7细胞NMDAR1的表达和成年AM无明显差异。 2.RT-PCR法检测到新生大鼠AM NMDAR1mRNA的表达明显高于成年大鼠AM,持续高氧暴露后新生大鼠AM中NMDAR1mRNA的表达进一步增强,RAW264.7细胞NMDAR1mRNA的表达与成年大鼠AM无明显差异。 3.Real-time PCR法检测到NMDAR各亚型mRNA在4组细胞均有表达,以NMDAR2D表达最强,NMDAR1次之,NMDAR2C、NMDA2B和NMDA2A表达水平较低。新生大鼠AM NMDAR各亚型mRNA比成年大鼠AM有较高表达,高氧暴露后新生大鼠AM NMDAR各亚型mRNA的表达进一步增强。 结论: 1.在成年大鼠AM、新生大鼠AM及RAW264.7细胞上除有NMDAR1及NMDAR2D亚型的表达外,还存在NMDAR2A、NMDAR2B、NMDAR2C亚型的表达。 2.肺泡巨噬细胞NMDA受体呈年龄依赖性表达。 3.持续高氧暴露可以上调肺泡巨噬细胞NMDA受体各亚型的表达,提示肺泡巨噬细胞是NMDA受体参与高氧性肺损伤的重要靶细胞。 第二章NMDA受体激活对肺泡巨噬细胞一氧化氮产生及分泌的影响 目的:研究表明一氧化氮(nitric oxide,NO)在兴奋性神经毒性所致的中枢神经系统损伤中起着关键的作用。Said等发现NMDA受体拮抗剂MK-801和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂(L-NAME)可以减轻NMDA引起的离体肺高通透性肺水肿,表明NMDA在肺脏的损伤作用同样也是NO依赖性的。本研究的目的在于观察NMDA受体激活对离体培养的肺泡巨噬细胞NO的产生及分泌有何影响,进一步证明肺泡巨噬细胞通过NMDA受体的激活促进NO的产生和分泌,而参与高氧性肺损伤的发生发展过程。 方法: 1.用生化试剂盒测定不同浓度、不同时间NMDA干预对肺泡巨噬细胞产生及分泌NO的影响。 2.根据NO与NMDA的量效与时效关系,选择适宜的NMDA干预条件对肺泡巨噬细胞进行干预后,对细胞的活力、细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞提取物中丙二醛(MDA)含量进行测定。 3.用生化试剂盒检测NMDA对肺泡巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性的影响。 4.Real-time PCR法检测NMDA对肺泡巨噬细胞iNOSmRNA的影响。 结果: 1.肺泡巨噬细胞分泌NO的量与NMDA有一定的剂量依赖性关系,随着NMDA浓度的增加NO的量逐渐增多,NMDA 1μmol/L时NO的量达顶峰,NMDA 10μmol/L时NO的量较前明显下降;肺泡巨噬细胞分泌NO的量与NMDA干预的时间有关,NMDA1μmol/L干预6h时NO的量达顶峰,干预8h时NO的量较前明显下降。 2.1μmol/L NMDA干预肺泡巨噬细胞6h对细胞活力、LDH活性、MDA含量无明显影响,表明此干预条件未对细胞造成损伤。 3.NMDA(1μmol/L)与肺泡巨噬细胞共培养6h,细胞iNOSmRNA表达及活性、细胞培养上清液中NO含量均较对照组明显增高,MK-801(10μmol/L)预处理细胞30min后再给予NMDA干预,iNOSmRNA表达及活性、NO含量均较NMDA组明显下降。 结论:NMDA受体激活可以增加肺泡巨噬细胞iNOS的转录,提高iNOS的活性,促进肺泡巨噬细胞NO的产生和分泌,表明肺泡巨噬细胞可能是肺损伤时NO增多的重要细胞来源。 第三章NMDA受体激活对肺泡巨噬细胞分泌促炎性细胞因子的影响 目的:本研究小组前期结果表明高氧性肺损伤时新生大鼠支气管肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2mRNA的表达及分泌明显增加,MK-801可以抑制上述效应,表明在整体水平上,NMDA受体激活参与介导了高氧性肺损伤时肺内促炎性细胞因子分泌增多的过程。本研究目的在于观察NMDA对体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2的影响,论证NMDA受体的激活可以促进肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子的产生和分泌及肺泡巨噬细胞是高氧性肺损伤时促炎性细胞因子产生的重要来源的假说。 方法: 1.ELISA法测定细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2含量。 2.Real-time PCR法检测肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2mRNA表达。 结果:NMDA可以上调肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2mRNA表达及分泌,MK-801可以抑制上述效应。 结论:NMDA受体的激活能够上调肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2的表达并促进其分泌,表明肺泡巨噬细胞是高氧性肺损伤时促炎性细胞因子分泌增多的重要来源。 第四章NMDA受体激活促进肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子产生和分泌机制的初步研究 目的:前文发现,NMDA可促进肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子的转录和分泌,但NMDA是通过何种信号转导途径影响促炎性细胞因子转录尚不清楚。在高氧性肺损伤的炎性反应过程中,NF-κB参与了肺泡巨噬细胞的活化,并控制着多种促炎性细胞因子的基因表达。细胞因子、NO等相互激发、相互影响在高氧性肺损伤过程中起着重要的作用。本研究将进一步探讨NO、NF-κB在NMDA促进肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子产生和分泌中的作用,以论证NF-κB是NMDA受体激活影响肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子产生和分泌的重要信号转导途径的假说。 方法: 1.化学法测定细胞培养液中NO含量和细胞提取物iNOS活性,ELISA法、Real-time PCR法分别检测细胞TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2含量及TNF-α、IL-1β、IL-6、MIP-2及iNOSmRNA表达,反映NO、NF-κB在NMDA促肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子分泌中的作用。 2.Western Blot法测定NF-κBp65、I-κBα蛋白水平的变化,反映肺泡巨噬细胞NF-κB的激活。 3.凝胶滞留实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)测定肺泡巨噬细胞NF-κB与DNA的结合活性。 结果: 1.AG(iNOS选择性抑制剂,100μmol/L)可以抑制NMDA诱导的肺泡巨噬细胞iNOS活性、NO含量、TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2mRNA及分泌的增加,但对iNOSmRNA表达无明显影响。 2.SN50(NFκB转录因子的核转位抑制剂,15μmol/L)可以抑制NMDA诱导的肺泡巨噬细胞iNOSmRNA表达及活性、NO含量、TNF-α、IL-1β、IL-6和MIP-2 mRNA及分泌的增加。 3.Western Blot实验显示NMDA可以通过促进肺泡巨噬细胞I-κBα的降解而激活NF-κB,MK-801、AG、SN50可以抑制NMDA诱导的I-κBα的降解及NF-κB的激活。 4.EMSA实验显示NMDA可以增强NF-κB的DNA结合活力,MK-801、AG、SN50可以抑制NMDA诱导的NF-κB DNA结合活力的增加。 结论:NF-κB是NMDA受体激活促进肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子分泌过程中的重要转录调控因子,NO可能通过促进NF-κB的激活而增加促炎性细胞因子的分泌。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R722.1

免费申请
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 苏芸;谢泽锋;许燕璇;辛岗;李康生;;脂多糖刺激星形胶质细胞SOCS-3及促炎性细胞因子的表达[J];中国热带医学;2011年07期
2 张燕;杨建国;;炎性衰老与老年性聋[J];医学综述;2011年14期
3 全裕凤;郑明慈;张华;张培林;张红;;高氧暴露对早产大鼠肺组织中HO-1与iNOS表达的影响[J];中国当代儿科杂志;2011年07期
4 童瑾;尤列·皮尔曼;维克多·科罗索夫;;JNK信号通路介导机械牵张引发的肺泡巨噬细胞炎性因子表达[J];中国老年学杂志;2011年16期
5 兀威;刘凯歌;刁鑫;陈晖;刘延峰;曹博淦;;抗c-kit特异性siRNA对肺泡巨噬细胞介导的炎性因子生成的影响[J];陕西医学杂志;2011年07期
6 王献华;蒋建姝;;二氧化硅对人肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞IL-1β表达意义[J];中国职业医学;2011年03期
7 卢致民;王燕;张秀昌;唐红炜;;肺孢子菌肺炎大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能及TNF-αIL-6的变化[J];中国血吸虫病防治杂志;2011年04期
8 李红梅;何庆南;李晓燕;帅兰军;周频;易著文;;槐杞黄对哮喘大鼠Th1/Th2/Th17细胞因子及肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响[J];中国当代儿科杂志;2011年09期
9 王丽娜;陈晓琳;王兴友;;11β-羟基类固醇脱氢酶1在炎症调控中的作用[J];医学综述;2011年10期
10 张旭;李佳;;吉兰-巴雷综合征临床免疫学研究现状[J];中国神经免疫学和神经病学杂志;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 蒲静;杨汉春;司兴奎;周双海;郭鑫;;PRRSV感染对猪肺泡巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
2 李兴旺;金胜威;张冰;;蛋白酪氨酸磷酸化在内毒素诱导肺泡巨噬细胞表达明胶酶B中的作用[A];2007年浙江省麻醉学学术年会论文汇编[C];2007年
3 贾浩;徐广贤;王玉炯;;牛结核分枝杆菌溶血磷脂酶对小鼠肺泡巨噬细胞IL-6、NF-κB、[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
4 孙树勋;;咽太对吸入煤尘大鼠肺泡巨噬细胞的影响[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
5 钱小顺;朱庆磊;杨洁;尹彤;丁秀云;王士雯;;老龄对大鼠多器官衰竭模型肺泡巨噬细胞炎症反应的影响[A];第七届全国老年医学学术会议暨海内外华人老年医学学术会议论文汇编[C];2004年
6 黄翠萍;杨和平;;p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
7 谷振勇;齐风英;左连富;丛斌;;应用FCM测定肺泡巨噬细胞存活率和吞噬功能推断死亡时间的实验研究(文摘)[A];第五次全国法医学术交流会论文集[C];1996年
8 磨美兰;杨汉春;郭鑫;陈艳红;查振林;;猪繁殖与呼吸综合征病毒感染对猪肺泡巨噬细胞外源性抗原加工递呈相关分子的影响[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
9 陈良安;陈天狮;田庆;刘又宁;;全氟己烷对肺泡巨噬细胞生物学行为影响的实验研究[A];中华医学会第七次全国呼吸病学术会议暨学习班论文汇编[C];2006年
10 刘永平;管茶香;白洪波;刘惠君;张长青;;降钙素基因相关肽下调LPS诱导肺泡巨噬细胞MMP-9的表达及机制探讨[A];湖南省生理科学学会2004年度学术年会论文摘要汇编[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 康蓓;尘肺病的治疗[N];医药经济报;2009年
2 冯燕;由“开胸验肺”想到空气“尘毒”[N];医药养生保健报;2009年
3 程书权;旧“曲”新“词”魅力重现[N];医药经济报;2002年
4 张德雄;为何人家的孩子不感冒[N];健康报;2003年
5 北京朝阳医院呼吸与危重症医学科医学博士 叶俏;与吸烟相关的间质性肺病[N];保健时报;2009年
6 赵瑞祥;新型氟喹诺酮类抗菌药:莫西沙星(上)[N];中国医药报;2002年
7 霍学营 杨惠;免疫抑制的发生机理[N];河南科技报;2009年
8 ;拉扎碱类药预防肺损伤研究近况[N];中国医药报;2003年
9 王惟恒;抗痨当补维生素D[N];健康报;2003年
10 江春;慢支朋友,快戒烟![N];医药经济报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 尚利宏;NMDA受体激活对肺泡巨噬细胞分泌作用的影响及机制研究[D];中南大学;2008年
2 谢志坚;创伤大鼠单核细胞、肺泡巨噬细胞基因表达的差异性研究[D];第三军医大学;2004年
3 卫伟;抑制活化素受体样激酶5对炎性肺损伤后细胞外基质代谢的影响[D];第二军医大学;2007年
4 孙进;格帕沙星和HSR-903在肺上皮黏液层与肺泡巨噬细胞的分布[D];沈阳药科大学;2002年
5 张旭晨;地鼠实验性肺气肿、肺动脉高压某些发病机理探讨及中药肺舒灵防治作用的观察[D];中国协和医科大学;2000年
6 黄亚东;兔不同亚型单核/巨噬细胞与动脉粥样硬化发病关系的研究[D];中国协和医科大学;1991年
7 曹国强;细胞凋亡在慢性阻塞性肺疾病发病中的作用研究[D];第三军医大学;2004年
8 曹蕾;发育肺炎症损伤和信号传导途径的研究[D];复旦大学;2004年
9 任大宾;高迁移组蛋白1诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达诱生型一氧化氮合酶的机制及其在急性肺损伤发生中的作用[D];中国协和医科大学;2005年
10 耿红;沙尘暴对健康的影响及沙尘暴PM_(2.5)对肺泡巨噬细胞的损伤[D];山西大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张剑锋;甘利欣对急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-10、IL-18mRNA表达水平的影响[D];中国医科大学;2003年
2 李宏云;脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB活化及TNF-α 释放的实验研究[D];郑州大学;2003年
3 张文凯;急性肺损伤中中性粒细胞的迁移和肺泡巨噬细胞的作用[D];山西医科大学;2005年
4 崔磊;氯膦酸二钠脂质体对重症急性胰腺炎大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响[D];江苏大学;2009年
5 陈天狮;全氟已烷对大鼠肺泡巨噬细胞生物学行为的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2005年
6 刘秀娟;糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞功能变化及胰岛素治疗的影响[D];中国医科大学;2007年
7 符莉芳;吲哚美辛对二氧化硅诱导的大鼠肺泡巨噬细胞溶菌酶蛋白表达的影响[D];浙江大学;2008年
8 邓建军;工业常用矿物粉尘表面理化特性对肺泡巨噬细胞细胞毒性的实验研究[D];四川大学;2003年
9 范建军;异丙酚对急性肺损伤细胞模型的NF-KB活性的影响[D];山西医科大学;2005年
10 黄杨;白介素-10和一氧化氮抑制内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB活化及肿瘤坏死因子释放的实验研究[D];第四军医大学;2001年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026