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CsA和TNF-α对体外培养GFs增殖和胶原代谢的影响

韦艺  
【摘要】: 目的:研究环孢霉素A(CsA)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养人牙龈成纤维细胞(GFs)增殖和胶原合成的影响。探讨牙龈炎症与药物性牙龈增生的关系及CsA所致牙龈增生的相关机理。 方法:用原代培养的方法获取正常人牙龈成纤维细胞,体外培养、传代后,取生长良好的4~8代用于实验。按以下条件进行实验分组:A:空白对照组B_1:10ug/L CsA,B_2:50 ug/L CsA,B_3:250 ug/LCsA,B_4:1250 ug/L CsA,C:5ug/L TNF-α,D_1:10 ug/L CsA+5ug/LTNF-α,D_2:50ug/L CsA+5ug/L TNF-α,D_3:250ug/LCsA+5ug/LTNF-α,D_4:1250 ug/L CsA+5ug/L TNF-α。将条件培养液分别作用于牙龈成纤维细胞,培养3,5,7天后用MTT法测定细胞的增殖情况,并分别于第3,5,7天收集培养上清液,用羟脯氨酸法测定胶原合成情况。 结果:原代培养成功率为80%,细胞呈梭形,排列成条索状,漩涡状。细胞经CsA和TNF-α作用后形态无明显变化。不同浓度的CsA作用于成纤维细胞后,细胞的增殖受到抑制,A值下降,其中B_1、B_2、B_3组与对照组无显著差别,B4组与对照组相比差异具有统计学意义。5ug/L的TNF-α作用于成纤维细胞可以刺激细胞的增殖,A值与对照组相比显著升高(P<0.01)。CsA和TNF-α共同作用于成纤维细胞后,D_1、D_2、D_3组A值较A组升高,但较C组降低。D4组细胞增殖显著增加,与C组相比差异具有统计学意义。 不同浓度的CsA作用于成纤维细胞后,上清液中胶原含量增加,且随着浓度的升高和培养时间延长,增加越明显。5ug/L的TNF-α作用于成纤维细胞后,上清液中胶原含量降低,与对照组相比差异具有统计学意义。CsA和TNF-α共同作用于成纤维细胞时,上清液中胶原含量增加,D_3、D_4组分别与B_3、B_4组相比,差异具有统计学意义,但D_1、D_2与B_1、B_2组相比,差异没有统计学意义。 结论:本实验通过体外培养人牙龈成纤维细胞,将不同浓度的CsA和TNF-α作用于细胞,观察细胞增殖和胶原合成的变化。结果表明: 1.CsA对成纤维细胞的增殖没有促进作用,高浓度时抑制细胞的增殖。CsA可以刺激细胞的胶原合成,这可能是CsA引起牙龈增生的主要机制。 2.高浓度CsA与TNF-α共同作用于成纤维细胞时,促进成纤维细胞的增殖。提示在一定浓度下CsA可能放大TNF-α刺激成纤维细胞增殖的效应。 3.一定浓度的CsA和TNF-α共同作用于成纤维细胞时,促进胶原含量的增加。提示TNF-α可能增加了成纤维细胞对CsA的敏感性。


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