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VEGF小干扰RNA抑制兔角膜新生血管的实验研究

周金子  
【摘要】: 研究背景:血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor,VEGF)是角膜新生血管形成最主要的生长因子,研究VEGF在角膜新生血管形成中的致病机制,调控其表达将是防治角膜新生血管性疾病的有效途径。 目的:本研究以兔角膜碱烧伤新生血管动物模型为研究对象,探讨VEGF小干扰RNA(VEGF siRNA)对碱烧伤后角膜组织中VEGFmRNA和蛋白质表达的影响,进而评价其在治疗角膜新生血管疾病中的作用。 方法:本研究分三部分进行。第一部分:取普通家兔25只,采用碱烧伤方法(1mol/L NaOH溶液)诱导角膜新生血管模型,碱烧伤后不同时间(1、3、5、7、14d)采用形态学方法观察角膜新生血管的生长情况,免疫组织化学方法检测角膜VEGF的表达。第二部分:25只普通家兔双眼角膜碱烧伤后(1mol/L NaOH溶液)立即以脂质体(LF2000)为载体,右眼球结膜下注射VEGFsiRNA重组质粒,左眼球结膜下注射pSilencer 2.1-U6 hygro空白质粒作为对照。碱烧伤后1、3、5、7、14 d,形态学分析评价角膜新生血管的生长情况。第三部分:在完成角膜形态学分析后,分别于碱烧伤后1、3、5、7、14d,采用RT-PCR方法检测角膜组织中VEGF mRNA的表达,免疫组织化学法检测角膜组织中VEGF蛋白质的表达。 结果:第一部分:角膜碱烧伤后24hVEGF的表达开始升高,伤后5d达高峰,伤后7dVEGF的表达开始下降,14d后显著下降。碱烧伤后,角膜新生血管与VEGF的表达呈明显的平行关系。第二部分:与对照眼相比,碱烧伤后球结膜下注射VEGFsiRNA重组质粒,实验眼在各时间段,CNV长度明显变短,面积明显变小,差异有统计学意义(p<0.05)。第三部分:与对照眼相比较,实验组在各时间段RT-PCR结果显示角膜组织中VEGF mRNA的表达明显下调,免疫组织化学结果显示角膜组织中VEGF蛋白质的表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:碱烧伤后兔角膜VEGF的表达水平与新生血管的形成有相关性,并在其中发挥了重要作用。VEGFsiRNA能有效地抑制碱烧伤后角膜组织中VEGF mRNA及蛋白质的表达,从而抑制角膜新生血管的形成。


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