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《中南大学》 2008年
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人免疫缺陷性病毒基因重组脊髓灰质炎病毒疫苗的实验研究

路晓林  
【摘要】: 艾滋病是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的一种传染病,以破坏人体的免疫功能为致病特征,以性接触、血液传播为主,目前在全球的蔓延呈不断扩大的趋势。虽然药物治疗对一部分患者有效,但价格十分昂贵,且易复发、产生耐药。而绝大部分患者在经济落后的发展中国家,因此研制价格便宜、接种方便的有效HIV疫苗是当务之急。 目前研制的HIV疫苗种类很多,既有传统的病毒病毒失活疫苗、减毒活疫苗,也有新型的核酸疫苗、合成肽链疫苗、病毒载体疫苗等,但在临床试验效果均不理想。原因可能与HIV的高度变异、致病机理尚不清楚、抗体滴度不高多种因素有关。鉴于艾滋病主要以粘膜途径传播为主,研制一种能刺激机体产生较强粘膜免疫能力的疫苗可能对预防HIV的传播起重要作用。 脊髓灰质炎病毒(PV)是一类单股正链RNA病毒,具有自主的复制能力。减毒的Sabin株疫苗在防止脊髓灰质炎多年的防疫实践中证实安全、有效,以口服途径为主,有较好的粘膜免疫诱导功能。为此,本研究拟以减毒的脊灰病毒SabinⅠ为载体,以HIV中国主要流行病毒株的基因为抗原,研制一种有实际推广价值的HIV疫苗。 首先以HIV-1CN54株gagpol基因的cDNA为模板,通过PCR反应获得了gagprotease基因片段,并于其两端带上合适的酶切位点。将携带脊灰病毒cDNA的真核表达质粒载体通过酶切反应,将PV位于两个单一酶切位点的结构基因部分片段予以切除,而后由酶连接反应将HIV-1的gagprotease抗原基因片段与PV的cDNA酶切后的粘性末端进行连接,并保持了正确的阅读框架,经双酶切反应证实被正确地定向插入了载体上。对培养的Hela细胞,将重组的表达载体与由真核表达载体反式提供的PV结构基因实行共转染,实现缺陷性脊灰病毒的细胞内重新组装,并在电子显微镜下观察,发现细胞内有重组病毒产生。经显微镜下对转染的细胞连续观察48小时,未发现有明显的细胞病变效应。由于此重组缺陷病毒不产生子代病毒,没有传染性,因而有较好的生物安全性。 对培养的人二倍体细胞进行扩大培养,大规模生产重组病毒疫苗。采用蔗糖梯度离心法分离、纯化病毒颗粒,后以RT-PCR、WesternBlot对其进行鉴定,证实该病毒基因组带有抗原基因,壳蛋白呈典型的PV结构。使其对Hela细胞进行感染性、表达检测,发现能在细胞内正确表达抗原基因。 本实验另将HIV-1gagprotease基因插入了真核表达载体的多克隆位点上,制备了一个DNA疫苗,并采用脂质体技术转染细胞,以免疫荧光技术证实它能在细胞内有HIV抗原蛋白产生。 在随机分配的脊灰受体转基因小鼠身上,以研制的两种疫苗分别隔月进行了三次经鼻腔粘膜免疫接种,以ELISA法检测IgG、IgA体液免疫反应,以乳酸脱氢酶释放试验检测淋巴细胞免疫效应,结果显示重组的脊灰病毒疫苗整体诱导的免疫效果均DNA疫苗要好,部分结果相比差异有统计学意义,且差异显著;部分差异不太明显。此结果可能与其感染性较强、能在细胞能多次复制表达抗原能力较高相关。未发现疫苗有明显的毒性作用。 结论:HIV抗原基因重组的缺陷性脊髓灰质炎疫苗有较好的免疫原性,对预防艾滋病的传播应有较好的应用前景。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R392

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 韦莉,刘爵,张杰,张方亮,姚炜光,周蛟;用蔗糖密度梯度离心法提纯禽脑脊髓炎病毒[J];北京农业科学;1999年06期
2 贾庆梅;脊髓灰质炎病毒继发感染诱导细胞病变(英文)[J];河南医学研究;2004年02期
3 廖国阳,姜述德,陈巍,王燕,史荔,马波,余芬;硫鱼精蛋白去除OPV中Vero细胞基质DNA的研究[J];云南大学学报(自然科学版);1999年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈扬超,宋超,罗超权;短发夹状RNA在人细胞诱导RNA干扰(英文)[J];癌症;2003年06期
2 于永忠;吴志军;朱战波;潘求真;崔玉东;;羊口疮病毒分子特征与免疫逃逸策略[J];病毒学报;2012年03期
3 胡俊西;RNAi导致基因静寂的机制和应用进展[J];重庆科技学院学报;2005年01期
4 郑敏;;痘病毒免疫调节策略[J];传染病信息;2007年02期
5 鲍扬,李可洲,黎介寿;全肠外营养加用维生素A、E、C对严重腹腔感染大鼠肠屏障功能的影响[J];肠外与肠内营养;2000年04期
6 戴先文,王全平,杨旻,李立文,韩利华,胡蕴玉;RNAi法特异性抑制骨保护素配体[J];第四军医大学学报;2004年09期
7 谢富华;吴小云;王润秀;熊亮;梁念慈;;Survivin shRNA真核表达载体的构建及其生物学作用[J];第四军医大学学报;2008年12期
8 王明栋;王洪;马文斌;史彦芳;王任直;;慢病毒载体介导半乳凝素-3-shRNA沉默基因对肿瘤细胞的影响[J];第四军医大学学报;2008年12期
9 傅锦坚;林元藻;胡立勇;;单纯疱疹病毒疫苗的研究进展[J];广东药学院学报;2008年01期
10 何美文,戴植本;门静脉高压症大鼠肠道T淋巴细胞亚群的免疫组化分析[J];华夏医学;2003年02期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐丽;马铃薯Y病毒复制酶基因介导的病毒抗性研究[D];山东农业大学;2010年
2 陈齐;DUSP5等胚胎干细胞自我更新相关基因的RNA干扰研究[D];浙江大学;2010年
3 乔小放;RNA干扰SUMO1基因对结肠癌Hct116细胞生物学行为的影响[D];吉林大学;2011年
4 邓盎;利用RNAi技术抑制ERβ表达对人成骨细胞株hFOB 1.19中TGF-β1和BMP-2表达的影响[D];中南大学;2011年
5 毛正发;SPARC在胰腺癌中的作用及其增加化疗敏感性的机制[D];复旦大学;2011年
6 鲍扬;创伤感染后维生素代谢障碍的机理和防治研究[D];第二军医大学;2002年
7 鲁晓春;利用钙离子调节基因治疗慢性充血性心力衰竭的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
8 刘丽华;关于禽脑脊髓炎病毒内蒙分离株基因组的研究[D];内蒙古农业大学;2003年
9 刘涛;谷氨酰胺对早期断奶仔猪肠道营养与免疫功能影响机理的研究[D];华中农业大学;2002年
10 徐芳玲;汉坦病毒对人胚肺成纤维细胞基因表达及细胞凋亡的影响[D];武汉大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙琦;水稻OsCOI基因表达载体构建及其遗传转化[D];甘肃农业大学;2010年
2 李小艾;ChREBP基因RNA干扰真核表达载体的构建、筛选及转染[D];西北民族大学;2010年
3 左胜男;七味白术散对HRV感染乳鼠小肠iEL CD3~+T细胞核中抗病毒蛋白表达的影响及清除肠道HRV作用[D];湖南中医药大学;2011年
4 王文强;抗鸡SIgA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立[D];河南科技大学;2010年
5 党引利;单纯疱疹病毒1型糖蛋白C真核表达载体的构建及表达[D];第四军医大学;2011年
6 李君丽;携带HSV-2 gB CTL表位的gD抗原制备及其免疫效果评估[D];西北农林科技大学;2011年
7 高振兴;绿茶提取物EGCG抗乙型肝炎病毒的分子机理研究[D];河南农业大学;2011年
8 赵珊珊;板蓝根多糖对无初乳仔鼠免疫功能的影响[D];河南农业大学;2011年
9 徐耀辉;禽脑脊髓炎病毒河南株的分离鉴定与VP0基因的克隆与序列分析[D];河南农业大学;2002年
10 孙进华;禽流感病毒(H9N2亚型)NS基因的克隆及表达载体的构建[D];东北农业大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 刘爵,刘有昌,姚炜光,周蛟,崔京春,张方亮,刘尚高;禽传染性脑脊髓炎病毒的分离鉴定[J];北京农业科学;1998年01期
2 赵继勋,秦卓明,姚永秀,张秀美,张世栋,高峰;禽脑脊髓炎琼扩抗原的研制与应用[J];中国家禽;1997年04期
3 马学恩,赵振华;禽脑脊髓炎病毒的提纯和电镜观察[J];中国兽医科技;1995年07期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱人烈;艾滋病的传播与妇产科的关系[J];中国实用妇科与产科杂志;1988年06期
2 王永怡;;艾滋病的抗病毒治疗[J];传染病信息;1994年04期
3 亮凤;紧急防备!恐怖可怕的“世界瘟疫”正悄悄入侵[J];国际医药卫生导报;1998年06期
4 周英博,王瑞明;印度艾滋病形势严峻[J];全球科技经济了望;1999年06期
5 周永兴;艾滋病的临床表现[J];人民军医;1999年04期
6 何群;泰国艾滋病防制考察报告[J];广东卫生防疫;2000年03期
7 王树,idx.com.au;艾滋病相关知识复习及治疗思考[J];天津药学;2000年03期
8 彭春雷;日常生活接触能染上艾滋病吗?[J];解放军健康;2001年02期
9 ;人类将有可能在 10~20年内攻克艾滋病[J];世界科学技术;2001年04期
10 ;艾滋病救治网覆盖全省——河南力争绝大多数病人治疗不出村[J];卫生软科学;2005年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议日程表[A];中华医学会第四次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2009年
2 彭勃;李华伟;谢世平;郭选贤;;论艾毒伤元[A];中华中医药学会防治艾滋病分会第六届学术年会论文汇编[C];2008年
3 董永新;符林春;岑玉文;;中医药对艾滋病相关性腹泻的认识[A];中华中医药学会防治艾滋病分会第六届学术年会论文汇编[C];2008年
4 田金洲;时晶;张雷明;尹军祥;盛树力;任映;王蓬文;王蓉;;金思维提取物预防Aβ42淀粉样蛋白产生及其机制研究[A];中医药优秀论文选(下)[C];2009年
5 郭选贤;殷光辉;张华锴;闫俊峰;刘俊芳;;艾滋病疮疡中医病因病机的流行病学调查[A];中医药防治感染病之研究(九)——第九次全国中医药防治感染病学术交流大会论文集[C];2009年
6 董永新;符林春;岑玉文;张苗苗;李佩;;中医药对艾滋病相关性腹泻的认识[A];全国第2届中西医结合传染病学术会议暨国家中医药管理局第1届传染病协作组会议论文汇编[C];2008年
7 段全立;盛镭;;艾滋病并发口腔真菌感染的临床研究[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
8 许滨;郁国强;;艾滋病11例临床分析(摘要)[A];全国铁路第五届疾病控制学术研讨会论文集[C];2004年
9 郑华;周红梅;;我国艾滋病早期发现及交叉感染控制的研究现状[A];中华口腔医学会第六届全国口腔黏膜病学术会议论文集[C];2004年
10 牛建昭;王海光;付敏;;“康道神芝孢子粉胶囊”在艾滋病等难治疾病治疗中的疗效观察[A];第七届全国药物依赖性学术会议论文摘要汇编[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 易铭;对艾滋病一知半解 堪忧![N];中国妇女报;2005年
2 中国人民大学人口发展研究中心 彭现美;艾滋病的传播及对当今社会的影响[N];中国人口报;2005年
3 本报记者 周永峰;遏制病魔 我们在行动[N];中国水运报;2005年
4 陈之昌 何 青;南华县加大艾滋病防治工作力度[N];楚雄日报(汉);2005年
5 黄黎成 辑;禁毒与防治艾滋病[N];大理日报(汉);2005年
6 施新弟 杨银华 王达权;我州各地抓实艾滋病防治工作[N];大理日报(汉);2005年
7 李克杰;艾滋病立法应“公”“私”兼顾[N];法制日报;2005年
8 杨双齐 应晓燕 李水根;艾滋病高度疑似者该不该转科[N];健康报;2005年
9 严恒元;防治艾滋病 全球需努力[N];经济日报;2005年
10 本报驻南非记者 李锋;南非 防范抗击艾滋病[N];人民日报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 路晓林;人免疫缺陷性病毒基因重组脊髓灰质炎病毒疫苗的实验研究[D];中南大学;2008年
2 李政;酵母人工染色体(YAC)介导的含HS2定点突变的人β-珠蛋白基因簇在转基因小鼠中的表达[D];中国协和医科大学;1998年
3 朱化星;mRFP1报告基因表达及Gal4-UAS二元表达系统在小鼠中的应用[D];复旦大学;2005年
4 王波;血红素加氧酶-1活性变化对肿瘤细胞体外抗药性、体内生长影响的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
5 高俊;细菌人工染色体(BAC)介导的人载脂蛋白apoA-Ⅰ C-Ⅲ A-Ⅳ A-Ⅴ基因簇转基因小鼠研究[D];中国协和医科大学;2002年
6 冯东晓;细菌人工染色体(BAC)介导的人α-珠蛋白基因簇转基因小鼠的研究[D];中国协和医科大学;2001年
7 刘庆辉;带红系增强子的人βE-珠蛋白基因在转基因小鼠中的表达[D];中国协和医科大学;1992年
8 刘亚梅;疏肝健脾补肾方对CHB患者、HBV转基因小鼠的免疫调节作用研究[D];广州中医药大学;2007年
9 韦玉生;BAC介导ApoCⅢ增强子删除的人载脂蛋白apoAⅠ/CⅢ/AⅣ/AⅤ基因簇突变株转基因鼠系的建立以及其与完整基因簇转基因小鼠的比较研究[D];中国协和医科大学;2005年
10 范志强;蚓激酶基因在山羊乳腺中的表达及转基因小鼠的制备[D];中国医科大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 夏要友;腹部超声对中药治疗艾滋病疗效的评估[D];昆明医学院;2005年
2 宋春鑫;F-苷肽治疗HIV/AIDS有效性及安全性的临床探讨[D];中国中医科学院;2006年
3 王瑗瑗;河南省铁路流动人口艾滋病的知信行研究[D];昆明医学院;2004年
4 张慧;污名与歧视:以中国的艾滋病为例[D];清华大学;2004年
5 孙百军;应用时间序列模型对肾综合征出血热和艾滋病发病趋势预测的拟合研究[D];中国医科大学;2005年
6 周婷;新型HIV非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTIs)[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
7 张庆辉;同性恋的历史、理论与现状[D];四川大学;2005年
8 裴园丽;25例卡波西肉瘤临床分析[D];新疆医科大学;2008年
9 李辉;中国六城市男男性接触者高危行为与性传播疾病的相关关系研究[D];青岛大学;2006年
10 关喆;高危人群艾滋病防治知识知晓率研究[D];中国医科大学;2002年
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