收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

马兜铃酸与DNA相互作用的研究

高海燕  
【摘要】: 马兜铃酸(Aristolochic acid,AA)是一种肾毒性物质,具有致癌性及致突变性。马兜铃酸在体内或体外被代谢激活后,与DNA共价结合生成马兜铃酸-DNA加合物(AA-DNA),这是AA致癌及致突变的主要机制。作为AA暴露的生物标志物,AA-DNA加合物的研究具有非常重要的意义。然而,目前市场上尚无AA-DNA加合物的标准品,开展对其深入研究技术上存在许多难点。因此非常有必要建立一种方便、快捷制备AA-DNA加合物标准品的方法。 本论文采用体外化学活化法用AA直接与脱氧核苷反应合成AA-DNA加合物,进而用固相萃取进行样品前处理,采用液相色谱进一步纯化,制备出了高纯度的AA-DNA加合物标准品(>94%)。AA-DNA加合物的分析鉴定采用LC-DAD-FL及LC-ESI-Q-TOF-MS/MS的方法,对四种加合物(dA-AAI、dG-AAI、dA-AAII及dG-AAII)的色谱、质谱以及碎片形成模式进行了分析,为后续的AA-DNA加合物的研究工作奠定了基础。 作为AA暴露的生物标志物,AA-DNA加合物的检测分析对于深入研究AA的致癌及致突变性具有十分重要的意义。本论文发展了一种高灵敏、高特异性地同时检测三种AA-DNA加合物(dA-AAI、dG-AAI及dA-AAII)的方法—LC-荧光法(LC-FL)。为了得到高效快速的分离,我们使用HALO C18柱,在25%乙腈条件下三种加合物能够在5min内即得到完全的基线分离,在普通的液相色谱仪器上得到超高效液相色谱(UPLC)的分离速度和效果,大大提高了复杂产物的分离度。在优化得到的色谱及荧光检测条件下,三种加合物均呈现出很好的线性相关性(r>0.9980),检测限分别是:dG-AAI:11.75fmol;dA-AAII:0.32 fmol;dA-AAI:0.23 fmol。此外,我们对三种加合物的保留时间及峰面积进行了精密度考察,三种加合物均呈现出良好的日内及日间精密度。 为了探讨马兜铃酸对机体的化学损伤机制,在国内外现有研究的基础上,我们采用体外暴露的方式及发展的LC-FL法对经AA暴露的小牛胸腺DNA及体外培养的人肺癌细胞DNA损伤作用进行了研究。在AA暴露的CT-DNA中,三种加合物的水平分别是:dG-AAI:9.5个加合物/10~3个正常碱基,dA-AAI:5.0个加合物/10~3个正常碱基,dA-AAII:6.0个加合物/10~3个正常碱基。而在AAI对人肺癌细胞(A549)的损伤作用研究中,我们考察了AAI毒性作用的时间-效应关系及剂量-效应关系,结果显示随着暴露时间的延长和暴露剂量的增加,加合物的量成上升趋势。 综上所述,本论文发展的化学活化法合成、固相萃取纯化及液相色谱制备加合物的方法具有简便、快捷的优点,能够得到纯度很高的加合物标准品。而LC-FL方法检测AA-DNA加合物具有高灵敏、高特异性以及重现性好的优点,为AA-DNA加合物的研究提供了一种有力的手段,有望用于动物模型及人体内AA-DNA加合物的鉴定分析,对于临床疾病的防治工作具有重要意义。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 遆卫国;葡萄不同部位提取DNA的方法研究[J];山西师范大学学报(自然科学版);2002年01期
2 纪军,杨瑞馥;电化学生物传感器快速检测DNA研究进展[J];生物技术通讯;2002年02期
3 王志军,袁正宏,闻玉梅;DNA的电荷转移[J];生命的化学;2003年05期
4 冀海伟,刘道杰;卟啉试剂在DNA检测中的应用[J];化学试剂;2005年02期
5 ;Study on the binding mode of Mg(Sal_2trien) with DNA[J];Chinese Science Bulletin;2006年19期
6 刘孟黎;韦小谦;;两种DNA抽提方法的操作过程及影响因素分析[J];现代检验医学杂志;2006年05期
7 ;Effect of Concentration of DNA in DNA Damage Induced by γ-ray[J];Annual Report of China Institute of Atomic Energy;2006年00期
8 ;Effect of Dose Rate in DNA Damage Induced by γ-ray[J];Annual Report of China Institute of Atomic Energy;2006年00期
9 焦鹏;叶文静;常起;赵晓民;;从血液中提取DNA方法探讨[J];实用医技杂志;2007年03期
10 杨同文;朱自学;;厨房中粗提DNA[J];生物学通报;2007年03期
11 ;科学家确定一种新的与DNA复制相关的酶[J];广西科学;2008年01期
12 刘燕;刘孟洲;徐彦祥;;3种提取基因组DNA方法的比较分析[J];中国畜牧兽医;2008年04期
13 ;Advances in Research on Hepatitis B Virus DNA Integration[J];Virologica Sinica;2008年02期
14 吴发红;黄东益;黄小龙;周鑫;程文杰;;几种真菌DNA提取方法的比较[J];中国农学通报;2009年08期
15 王淑栋;宋弢;李二艳;;DNA Golay码的设计与分析[J];电子学报;2009年07期
16 斯坦莱·N·科恩;王顺德;;重组DNA——事实与虚构[J];世界科学译刊;1979年01期
17 张玉砚;徐永华;徐亚男;彭素芬;;DNA-膜固相核酸分子杂交技术及其应用[J];生物化学与生物物理进展;1979年02期
18 陈元霖,郑子修,叶文娟,李桂兰,吕慧梅;蚕类核酸的研究 1.氯仿去污剂法分离纯化蚕类DNA[J];动物学研究;1980年02期
19 Andrew H.-J.Wang;李昌本;;原子分辨水平的左旋双螺旋DNA片段的分子结构[J];世界科学译刊;1980年06期
20 赵寿元;;DNA有一种新的螺旋形吗?[J];世界科学译刊;1980年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 梁金玲;吴玲玲;周剑章;林仲华;;电化学石英晶体微天平研究DNA的控电位杂交[A];第十三次全国电化学会议论文摘要集(下集)[C];2005年
2 范新萍;;孕妇外周血中游离DNA的分级分离方法初探[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
3 郑利雄;李放娟;吴育庆;张桂梅;何桂荞;熊峰;;荧光定量PCR法在检测梅毒血清TP-DNA中的应用[A];中华医学会第十二次全国皮肤性病学术会议论文集[C];2006年
4 邵勇;刘亭丽;张罡棋;朱晓青;;基于脱碱基位点设计的DNA单核苷多型的小分子识别研究[A];中国化学会第十五届全国有机分析及生物分析学术研讨会论文集[C];2009年
5 关明;;高分辨熔解技术在分子检验中的应用[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
6 ;DNA G-quadruplexes as potential anticancer drug targets[A];第一届全国生物物理化学会议暨生物物理化学发展战略研讨会论文摘要集[C];2010年
7 张新跃;;牧草DNA基因多态性研究与在草业中的应用[A];中国草学会饲料生产专业委员会第十六次学术研讨会论文集[C];2011年
8 Michael M.Yang;;FABRICATION OF DNA CHIPS FOR DIAGNOSTIC AND ENVIRONMENTAL APPLICATIONS[A];首届粤港生物物理学术研讨会论文集[C];1999年
9 邓用川;陈菊培;罗越华;李冠一;林栖凤;;红树DNA导入水稻引起的变异[A];植物分子育种——第四届全国植物分子育种学术研讨会论文集[C];2004年
10 李延;张成孝;;电化学发光检测DNA的初步研究[A];中国化学会第十届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李艳伟;DNA条形码在中国榕小蜂中的应用研究[D];山东农业大学;2009年
2 张凤梅;石英致DNA双链断裂修复的DNA-PKcs/JNK/p53信号转导通路[D];中国疾病预防控制中心;2009年
3 蔡宏;新型DNA电化学生物传感器的研制及纳米材料在其中的应用研究[D];华东师范大学;2003年
4 李雪梅;含N化合物的合成、表征及与DNA作用机理的电化学研究[D];青岛科技大学;2006年
5 梁乐;功能DNA纳米结构在生物成像中的应用[D];中国科学院研究生院(上海应用物理研究所);2014年
6 王延峰;DNA计算中的编码理论与方法研究[D];华中科技大学;2007年
7 蒋伟;铜锌超氧化物歧化酶的核酸酶活性和DNA对其聚集的加速作用[D];华中科技大学;2007年
8 鲁卫平;DNA生物传感器快速检测病原微生物的实验研究[D];重庆医科大学;2009年
9 樊浩;DNA电化学生物传感器中的新方法学研究[D];华东师范大学;2010年
10 周剑章;分子自组装固定DNA和DNA与其他分子的相互作用及应用[D];厦门大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈雪姣;钌多吡啶配合物与DNA/RNA的键合机理及其抗肿瘤活性研究[D];湘潭大学;2010年
2 王平红;一些金属配合物与DNA相互作用研究[D];海南大学;2006年
3 郭爱敏;DNA分子电子结构及输运性能的研究[D];中南大学;2007年
4 李春宏;DNA甲基化检测方法的建立和广西巴马县人群白细胞DNA总体甲基化水平研究[D];广西医科大学;2008年
5 罗兴;基于DNA自组装模型的最大团问题研究[D];湖南大学;2012年
6 杨青喜;一种高效检测石蜡切片中的DNA的方法研究[D];长春理工大学;2013年
7 冯媛媛;聚苯胺及其衍生物复合纳米材料在DNA电化学生物传感器中的应用[D];青岛科技大学;2009年
8 赵剑;基于企业DNA视角的企业进化机制研究[D];陕西科技大学;2010年
9 史庭燕;树状DNA放大技术在临床基因诊断中的应用[D];东南大学;2004年
10 杨培菊;金属配合物与DNA的相互作用[D];西北师范大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 徐敏;DNA分子为何不稳定?[N];解放日报;2005年
2 刘工;DNA计算机微乎其微 功能强大[N];经济参考报;2002年
3 北京大学生命科学学院 侯巧明;DNA识别遗传信息判断人[N];计算机世界;2001年
4 陈丹;以科学家研制出DNA计算机[N];科技日报;2001年
5 郭朝元;克隆永续经营的DNA[N];民营经济报;2005年
6 本报记者 翟永太 聂同钢;DNA“精确制导”[N];人民公安报;2006年
7 张梦然;首个近乎完全由人造“零件”搭建的DNA分子问世[N];科技日报;2008年
8 韩梁;DNA证据可伪造,刑案鉴定蒙阴影[N];新华每日电讯;2009年
9 记者 郑晓春;可区分真伪DNA的检测技术问世[N];科技日报;2009年
10 记者 王艳红;以研制出新型DNA计算机[N];新华每日电讯;2001年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978