rAAV2介导EGFP基因体内转染兔晶状体上皮细胞的研究

【摘要】： 目的研究Ⅱ型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 2,rAAV2)载体介导的增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescentprotein,EGFP)基因对兔晶状体上皮细胞的体内转染情况,及其对角膜虹膜和后囊膜组织的毒性作用,为r AAV2携带目的基因防治后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)提供实验依据。 方法 1.将36只普通家兔(36眼)随机分成A组、B组、C组和D组4组,每组9只(9眼)。四组均行右眼晶状体超声乳化吸取术,术毕向B组、C组和D组晶状体囊袋内注入滴度分别为10~9v.g./ml、10~(10)v.g./ml、10~(11)v.g./ml的rAAV2-EGFP悬液0.1ml,向A组注入0.1mlBSS作为对照组。每只家兔均取左眼作为自身正常对照。 2.分别于术后第1、3、7、14、28天行裂隙灯检查,术后第1、2、4周行角膜内皮镜检查。术后第1、2、4周观察绿色荧光蛋白的表达情况,计算转染效率;并行角膜虹膜及后囊膜组织学检查。 结果 1裂隙灯检查术后第1天,所有术眼均有不同程度的睫状充血、角膜水肿和前房渗出,经药物治疗1周后上述体征逐渐减轻,2周内基本恢复正常。 2角膜内皮镜检查术后第1、2、4周行角膜内皮显微镜检查,结果显示角膜内皮细胞密度、细胞平均面积及变异系数各组对比差异无统计学意义(P＞0.05)。 3 EGFP转导部位的观察EGFP在晶状体前囊截囊部位和赤道部表达较多,而且荧光染色较深,后囊膜中央部位阳性细胞较少,染色较淡。 4 rAAV2-EGFP转染效率的观察术后第1周B、C、D组均出现EGFP表达,术后第4周D组的转染效率最高,达94.49%。同一时间不同滴度组以及同一滴度组不同时间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。A组始终未见EGFP表达。 5病毒载体对晶状体上皮细胞增殖、角膜及虹膜的影响角膜虹膜及后囊膜未见明显炎性反应及组织学损伤。 结论rAAV2载体能安全有效的在体内转染兔晶状体上皮细胞,并有浓度依赖性和时间依赖性;rAAV2对角膜虹膜及后囊膜等眼前段组织无明显毒性作用,是基因治疗PCO的理想载体。

【关键词】：重组腺相关病毒 增强型绿色荧光蛋白 晶状体上皮细胞 后囊膜混浊
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R776.1
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