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《中南大学》 2009年
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GM6001对人宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮单层细胞的影响

兰菁  
【摘要】: 目的:建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮单层细胞的模型(以下简称宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型),探讨MMP-9在宫颈鳞癌HCE1多细胞球体中的表达与宫颈癌浸润的关系,并研究基质金属蛋白酶抑制剂GM6001对宫颈癌HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞的影响。 方法: (一)、建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体的浸润模型 1、运用液体重旋培养法培养宫颈鳞癌细胞株HCE1多细胞球体; 2、培养人脐静脉内皮单层细胞; 3、宫颈鳞癌HCE1多细胞球体和人脐静脉内皮细胞共同培养:人脐静脉内皮细胞70000/孔接种于48孔板,培养48个小时。HCE1多细胞球体重悬于完全培基,调整浓度为5-10个/ml,每个孔板里加1ml。置37℃,5%CO_2及饱和湿度的培养箱共同培养7天。 (二)、免疫组化法检测宫颈鳞癌HCE1单层细胞、宫颈鳞癌HCE1多细胞球体及人脐静脉内皮细胞中MMP-9的表达 (三)、MMPs抑制剂GM6001干预宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型 1、实验分组:①对照组:同等浓度DMSO②GM6001 2.5uM组③GM6001 12.5uM组; 2、MMPs抑制剂GM6001对宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型的影响:宫颈鳞癌HCE1多细胞球体和人脐静脉内皮细胞共同培养1h,加入干预药物,并从实验开始的第1天,每天更换培基1ml及同等浓度的干预药物。光学显微镜下观察第0、1、4、7天宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型的浸润情况,用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统软件测量宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润范围,分析GM6001的抑制作用; 3、免疫组化检测宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型第4天各组MMP-9的表达。 结果: (一)、成功建立宫颈鳞癌HCE1多细胞球体的浸润模型 1、宫颈鳞癌HCE1多细胞球体的培养:宫颈鳞癌HCE1细胞生长状态良好,液体重旋法培养24小时可见细胞聚集成较小的松散聚集体,随培养时间的延长结构更加紧密,直径逐渐增大。 2、人脐静脉内皮细胞的培养:生长状态良好,呈多边形,相互紧贴,呈铺路石状。 3、宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型的建立:在共同培养1小时后,宫颈鳞癌HCE1多细胞球体紧密粘附于人脐静脉内皮细胞;随着培养时间的延长,宫颈鳞癌HCE1多细胞球体明显解聚,迅速扩散浸润人脐静脉内皮细胞,内皮细胞退缩明显。 (二)、免疫组化法检测MMP-9的表达:宫颈鳞癌HCE1多细胞球体中MMP-9高表达率明显高于宫颈鳞癌HCE1单层细胞(p<0.05)。人脐静脉内皮单层细胞MMP-9呈阴性表达。 (三)、MMPs抑制剂GM6001干预宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型: 1、GM6001 2.5uM组:与对照组比较,宫颈鳞癌HCE1多细胞球体解聚能力减弱,浸润范围缩小,人脐静脉内皮细胞退缩程度降低,至浸润第7天,宫颈鳞癌HCE1多细胞球体的浸润能力抑制率达26.09%,与对照组相比差异有显著性(p<0.05)。 2、GM6001 12.5uM组:与对照组比较,宫颈鳞癌HCE1多细胞球体未见明显解聚,浸润范围明显缩小,人脐静脉内皮单层退缩不明显,至浸润第7天,宫颈鳞癌HCE1多细胞球体的浸润能力抑制率达92.95%,与对照组相比差异有显著性(p<0.05)。 3、宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润模型第4天对照组和试验组中MMP-9的表达:GM6001 2.5uM组MMP-9高表达率较对照组降低(Pearson X~2=2.133,P>0.05),GM6001 12.5uM组高表达率较对照组明显下降(Pearson X~2=7.033,P<0.05)。 结论: 1、成功建立了宫颈鳞癌HCE1多细胞球体浸润人脐静脉内皮细胞的模型。2、HCE1多细胞球体中MMP-9的表达上调,可能与多细胞球体的浸润力增强有关。3、GM6001可以部分阻断HCE1多细胞球体对单层人脐静脉内皮细胞的浸润作用,下调宫颈鳞癌HCE1多细胞球体中MMP-9的表达。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R737.33

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【参考文献】
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