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《中南大学》 2010年
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人类不同原核数目受精卵中筛选正常优质胚胎的策略研究

廖宏庆  
【摘要】: 第一章:目的通过对正常原核数目的受精卵进行原核评级,在体外受精-胚胎移植治疗中筛选正常优质胚胎。方法回顾性分析本院2003年5月-2003年12月,采用联合评级筛选胚胎进行移植的434个周期,共2714个正常原核数目受精卵。根据受精卵原核发育是否同步,分为原核发育同步组和原核发育不同步组,观察不同原核等级受精卵的发育潜力。移植胚胎的选择首先根据胚胎发育速度及形态评级,其次根据原核评级时的等级。根据移植胚胎中是否含有原核发育同步组的胚胎,统计比较妊娠率和着床率。结果在2714个正常原核数目受精卵中,原核发育同步的受精卵1774个,其中优质胚胎(≥6细胞,形态评级为Ⅰ级或Ⅱ级)743个,优质胚胎率为41.9%;原核发育不同步的受精卵940个,其中优质胚胎319个,优质胚胎率为34.0%,两组比较,差异有统计学意义(P0.001)。有395个周期的移植胚胎中含有原核发育同步组的胚胎,妊娠率为47.9%(189/395),着床率为27.5%(273/993);有39个周期的移植胚胎中无原核发育同步的胚胎,妊娠率为43.6%(17/39),着床率为25.0%(21/84)。两组比较,差异无统计学意义。结论原核评级可以有效的预测胚胎的发育潜力和质量,有助于从正常原核数目受精卵中筛选正常优质胚胎。然而,在联合评级时,参考原核评级并不能获得更高的妊娠率和着床率。 第二章:目的比较来源于人类单原核受精卵的发育停滞胚胎、囊胚及人类胚胎干细胞系之间的核型构成,寻求是否能够通过囊胚培养可靠地筛选出单原核受精卵来源的正常核型胚胎。方法对单原核受精卵进行5天的囊胚培养,然后使用18号、X和Y染色体荧光探针对获得的囊胚以及发育停滞的胚胎进行荧光原位杂交分析;单原核受精卵来源的人类胚胎干细胞系通过G显带技术进行核型分析。结果囊胚的二倍体率(74.6%)显著高于(P0.001)发育停滞胚胎的二倍体率(31.6%),人类胚胎干细胞系的二倍体率(97.0%)则显著高于(P0.01)囊胚的二倍体率;通过囊胚培养可以淘汰单倍体异常核型的胚胎,然而单原核受精卵来源的囊胚中仍存在着嵌合体和单体等异常核型,单原核受精卵来源的人类胚胎干细胞系中存在三体异常核型。结论通过对单原核受精卵进行囊胚培养可以有效的筛选出正常核型的优质胚胎;并有效的淘汰异常核型胚胎,尤其是单倍体异常核型胚胎。不过囊胚培养并不能可靠的淘汰嵌合体和非整倍体等异常核型。 第三章:目的分析比较去除多余原核后三原核受精卵来源胚胎和完整三原核受精卵来源胚胎的核型构成,检验能否通过结合去除多余原核和囊胚培养可靠的筛选出三原核受精卵来源的恢复正常核型的胚胎。并尝试利用去除多余原核后三原核受精卵来源的囊胚建立人类胚胎干细胞系。方法实验组中的三原核受精卵通过显微操作去除多余原核后进行5-6天的囊胚培养;未去除多余原核的三原核受精卵行囊胚培养作为对照组。用17号、X和Y染色体探针对两组的胚胎进行荧光原位杂交分析核型。实验组中囊胚的内细胞团用于胚胎干细胞建系,对建立的细胞系进行干细胞特性鉴定。使用G显带方法进行核型分析,并通过DNA指纹分析干细胞的染色体组是否遗传自双亲。结果实验组的囊胚形成率为13.5%,显著高于(P0.05)对照组的囊胚形成率(8.7%)。实验组胚胎的三倍体率(5.7%)显著低于(P0.01)对照组的三倍体率(19.4%)。实验组囊胚的二倍体率(55.0%)显著高于(P0.05)实验组发育阻滞胚胎的二倍体率(18.4%)。而且,本研究利用去除多余原核的三原核受精卵来源囊胚建立了第一个正常核型(46,XX)的,并且染色体组遗传自双亲的人类胚胎干细胞系。结论去除多余原核可以有效的去除三原核受精卵中多余的一套染色体组,提高三原核受精卵的发育潜力。结合去除多余原核和囊胚培养能有效的筛选出恢复正常二倍体核型的优质胚胎,并能建立双亲遗传的正常核型的人类胚胎干细胞系。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R714.8

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【共引文献】
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