E1A基因对鼻咽癌放射增敏作用及机制研究
【摘要】：
目的探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌CNE-2Z细胞放射治疗的增敏作用及相关机制。
方法选用人鼻咽癌CNE-2Z细胞为靶细胞,分别用PBS,Ad-β-gal, Ad-E1A作用48小时后,用6MVX线分别给与0、2、4、6和8Gy剂量照射后,用MTT法和流式细胞仪检测三组细胞成活率及细胞周期变化,并进行克隆分析绘制细胞存活曲线,计算放射增敏比来观察E1A基因对人鼻咽癌CNE-2Z细胞放射敏感性的影响,同时用RT-PCR法检测三组细胞的VEGF水平的表达及野生型p53的表达。细胞免疫化学方法检测三组细胞的VEGF蛋白的表达。
结果RT-PCR结果显示Ad-E1A组可以检测到E1A基因的表达。经照射后Ad-E1A组的细胞存活率明显低于PBS对照组和Ad-β-gal对照组。Ad-E1A组的细胞的生长速度明显慢于PBS对照组和Ad-β-gal对照组。细胞存活曲线结果显示Ad-E1A组的CNE-2Z细胞放射增敏比分别为1.37(D0值比)、1.95(Dq值比)、1.46(SF2比)。PBS对照组和Ad-β-gal对照组的细胞照射后细胞存活曲线分析结果显示无差异,D0、Dq、SF2值分别为1.57Gy及1.53Gy、1.82Gy及1.78Gy、0.89及0.82。RT-PCR结果和细胞免疫化学结果显示Ad-E1A组比PBS对照组和Ad-β-gal对照组的人鼻咽癌CNE-2Z细胞的VEGF的表达明显下降,RT-PCR结果显示Ad-E1A组比PBS对照组和Ad-β-gal对照组的野生型p53水平明显上升。流式细胞学实验显示Ad-E1A组+放射治疗组细胞的凋亡明显高于其他组。
结论E1A基因通过下调人鼻咽癌CNE-2Z细胞VEGF的表达和上调野生型p53的表达来增加人鼻咽癌细胞对放射治疗的敏感性。
目的：探讨腺病毒E1A基因对人鼻咽癌动物模型放射增敏的实验研究。
方法：取对数生长期的CNE-2Z细胞5×105/0.2mL,接种于4周龄左右裸鼠右前肢腋部皮下致瘤,第7天裸鼠皮下肿瘤长至直径0.6-0.8cm时,随机分为6组(每组10个)：PBS组,Ad-β-gal组,放射组,Ad-β-gal+放射组,Ad-E1A组,Ad-E1A+放射组。Ad-β-gal组/Ad-E1A组在第2周开始给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109PFU/50μL的Ad-E1A/Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,放射组在第3周给予6MV-X照射,每天2Gy,连续5天。Ad-β-gal+放射组/Ad-E1A+放射组在第2周开始,给予荷瘤裸鼠皮下肿瘤内滴度为5×109 PFU/50μL的Ad-E1A/Ad-β-gal注射,每周2次,连续2周,在第3周给予6MV-X照射,每天2Gy,连续5天。第1次治疗后,每隔4天用卡尺测量1次肿瘤的体积,记录其直径,裸鼠的生存时间。当肿瘤的直径超过2cm时,处死裸鼠,分离肿瘤组织,采用免疫组织化学方法分析VEGF和CD34表达,RT-PCR分析wtp53的表达,Western blot分析VEGF的表达,TUNEL分析细胞凋亡。
结果：Ad-E1A+放射组较其他组能明显延缓移植瘤生长时间,Ad-E1A+放射组裸鼠的肿瘤平均体积比单独放射组小4.7倍,比单独Ad-E1A组的小5.3倍。Ad-E1A+放射组的裸鼠生存率显著高于其他治疗组。Ad-E1A+放射组的VEGF蛋白表达和微血管密度较其他各组明显下降。(P0.01)。Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组的wtp53基因表达明显上调。TUNEL分析结果显示Ad-E1A组和Ad-E1A+放射组及放射组的肿瘤组织内均可明显观察到凋亡细胞。并且,Ad-E1A+放射组肿瘤细胞凋亡数目明显高于Ad-E1A组或单独放射组。
结论：E1A基因通过抑制肿瘤血管的形成和上调肿瘤组织中wtp53的表达及诱导肿瘤细胞的凋亡来提高人鼻咽癌细胞对放射的敏感性。
【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R739.63
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