收藏本站
收藏 | 论文排版

MICA在NK细胞杀伤胰腺癌中的作用以及吉西他滨对胰腺癌细胞MICA蛋白脱落的影响

段小辉  
【摘要】: 目的 探讨MICA及NK细胞活化性受体NKG2D在胰腺癌表达和临床意义 方法 RT-PCR技术检测10例胰腺癌、6例慢性胰腺炎和6例正常胰腺组织中MICA mRNA水平。免疫组化技术检测64例胰腺癌、13例慢性胰腺炎和11例正常胰腺组织中MICA的表达。ELISA和流式细胞术分别检测53例胰腺癌,7例慢性胰腺炎和20例健康志愿者血清中可溶性MICA (sMICA)水平和外周血中NK细胞受体NKG2D的表达。 结果 1.胰腺癌组织MICA mRNA表达水平显著高于慢性胰腺炎和正常胰腺组织(P0.01)。 2.免疫组化显示胰腺癌组织中MICA阳性表达率为89.1%,显著高于慢性胰腺炎和正常胰腺组织(P0.01)。MICA表达强度与胰腺癌分化程度、远处转移和临床分期密切相关(P=0.042,0.028,0.003);MICA高表达的胰腺癌患者预后较好(P=0.019)。 3.胰腺癌患者血清sMICA水平显著高于健康志愿者和慢性胰腺炎患者(P0.01),Ⅲ/Ⅳ期胰腺癌患者血清sMICA水平高于Ⅰ/Ⅱ期患者(P0.01),有远处转移的胰腺癌患者血清sMICA水平较无转移患者明显增高(P0.01)。 4.sMICA阳性胰腺癌患者外周血中NK细胞受体NKG2D的表达强度明显低于健康志愿者、慢性胰腺炎患者和sMICA阴性胰腺癌患者(P0.01)。胰腺癌患者外周血中NK细胞受体NKG2D表达强度与血清sMICA水平呈显著负相关(P0.01) 5.胰腺癌根治性切除可以下调患者血清sMICA水平和上调NK细胞受体NKG2D的表达。 结论 MICA作为免疫监视分子在早期胰腺癌组织中广泛表达,随着胰腺癌进展,MICA从胰腺癌细胞表面脱落形成sMICA,血清中sMICA含量增高可能导致了NK细胞受体NKG2D表达的下调。胰腺癌根治性切除可以下调患者血清sMICA水平和上调NK细胞受体NKG2D的表达。 目的 探讨MICA在NK细胞杀伤人胰腺癌PANC-1细胞中的作用 方法 应用NK细胞分选试剂盒从外周血中负向分选高纯度NK细胞用于实验。体外培养人胰腺癌PANC-1细胞和人NK细胞,应用抗体封闭法,观察NKG2D与膜型MICA识别在NK细胞杀伤PANC-1细胞中的作用。将正常NK细胞在含有sMICA阳性胰腺癌患者血清的培基中培养,观察NK细胞受体NKG2D的表达以及NK细胞对PANC-1细胞的杀伤作用。 结果 1.经MICA或NKG2D抗体封闭后,NK细胞的杀瘤活性较封闭前显著减弱(P0.01) 2.胰腺癌患者血清中的sMICA可以下调NK细胞受体NKG2D的表达,并降低NK细胞对PANC-1细胞的杀伤活性。 结论 NKG2D与膜型MICA识别在NK细胞杀伤人胰腺癌PANC-1细胞中起重要作用。sMICA是造成胰腺癌免疫逃逸的重要分子机制之一。 目的 探讨ADAM10在PANC-1细胞MICA蛋白脱落过程中的作用,观察吉西他滨对MICA蛋白脱落的影响并探讨可能的作用机制。 方法 免疫组化检测64例胰腺癌和11例正常胰腺组织ADAM10的表达情况。通过化学合成的小分子干扰RNA(siRNA)下调PANC-1细胞ADAM10表达后,流式细胞术和ELISA分别检测细胞表面MICA的表达强度和细胞上清中sMICA的含量。采用MTT法检测不同浓度吉西他滨对PANC-1细胞增殖的影响。选择浓度为5ng/ml的吉西他滨作用PANC-1细胞24小时,RT-PCR和Western blot检测细胞中ADAM10 mRNA和蛋白表达水平,同时用RT-PCR、流式细胞术和ELISA分别检测MICA mRNA、细胞表面MICA的表达强度和细胞上清中sMICA的含量。先用ADAM10 siRNA或阴性对照siRNA转染PANC-1细胞,转染24小时后,再加入吉西他滨(对照组加等体积培基)继续培养24小时,流式细胞术和ELISA分别检测细胞表面MICA的表达强度和细胞上清中sMICA的含量。 结果 1.ADAM10在胰腺癌组织中阳性表达率(87.5%)显著高于正常胰腺组织(P0.01)。 2.下调ADAM10表达后,PANC-1细胞表面MICA表达增强,而细胞上清液中sMICA的含量减少(P0.01)。 3.当培基中浓度小于7ng/ml时,吉西他滨在24小时内对PANC-1细胞增殖无明显影响(P0.05)。 4.吉西他滨显著下调PANC-1细胞ADAM10mRNA和蛋白的表达水平(P0.01)。 5.吉西他滨(5ng/ml)作用PANC-1细胞24小时后,细胞表面MICA表达增强,细胞上清液中sMICA的含量减少(P0.01)。吉西他滨对PANC-1细胞MICA mRNA表达无明显影响。 6.siRNA下调ADAM 10表达后,吉西他滨对PANC-1细胞表面MICA蛋白的表达和上清液中sMICA的含量无明显影响(P0.05)。 结论 ADAM 10在PANC-1细胞MICA蛋白脱落过程中具有重要作用。吉西他滨可以抑制PANC-1细胞MICA蛋白的脱落,其机制可能与下调ADAM 10的表达有关。


知网文化
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978