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《中南大学》 2010年
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农达对雄性生殖细胞的毒性作用及其机制的初步研究

黄婷  
【摘要】: 研究目的: 通过GC.1小鼠精原细胞体外试验及小鼠精子畸形体内试验,探讨农达对雄性生殖细胞的毒性作用及其可能作用机制。 研究方法: GC-1小鼠精原细胞体外试验:以GC-1细胞为受试细胞,通过MTT试验筛选农达染毒浓度及NAC干预浓度。其后续试验中NAC干预浓度为101μmol/L,预处理1h,农达染毒浓度定为60、90、120、150、180mg/L,染毒时间为24h。将GC-1细胞随机分成对照组(第1组)、农达染毒组(第2-6组)、10mmol/L NAC+90 mg/L农达染毒干预组(第7组)。GC-1细胞的形态学改变,采用姬母萨染色法在光镜下观察;农达对GC-1细胞膜通透性影响和细胞毒性作用采用乳酸脱氢酶(LDH)活性水平结合台盼蓝拒染法评价;农达诱导GC-1细胞氧化损伤程度选用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量指标评价;用彗星实验检测细胞DNA损伤。 小鼠精子畸形体内试验:将100只昆明种雄性小鼠随机分为5组(每组20只),即290mg/kg、580mg/kg、1160mg/kg农达染毒组、1个阴性对照组和1个阳性对照组。各染毒组和阴性对照组采用灌胃给药,阳性对照组采用腹腔注射,连续给药5天,将动物于给药第7、28、35天分三批处死,观察睾丸、附睾重量及其脏器系数,分析精子数和精子畸形率的变化。 结果: GC-1小鼠精原细胞体外试验: 1、农达在60-180mg/L处理浓度范围内,能明显引起GC-1细胞存活率的降低(P0.05),处理浓度和细胞存活率之间存在负相关(r=-0.992,p0.01)。 2、农达在60-180mg/L处理浓度范围内,引起GC-1细胞皱缩或肿大,染色质浓染,细胞间隙扩大,空泡样变。随着农达浓度的增加变化明显,细胞密度也明显减少,细胞膜和核膜不完整或消失,染色质嗜碱性降低。加入NAC有保护作用。 3、农达在90-180mg/L处理浓度范围内,引起细胞培养上清液中LDH活性增加(p0.05),台盼蓝染色实验表明农达引起细胞膜受损率增加(p0.05),NAC能减少细胞毒性。 4、农达在60-180mg/L处理浓度范围内,能明显诱导细胞DNA的链断裂,剂量越高,DNA断裂程度越严重,彗星率越高(P0.05);NAC+90mg/L处理组,与90mg/L处理组相比DNA损伤程度减轻(P0.05)。 5、农达在60-180mg/L处理浓度范围内,随染毒剂量增大,MDA生成增多SOD、GSH活性明显降低,与对照组比较差异有显著性(P0.05);加入NAC后有明显保护作用(P0.05)。 小鼠精子畸形体内试验: 1、与阴性对照组比较,580mg/kg、1160mg/kg农达剂量组可使小鼠精子数目明显减少(p0.05)、精子畸形率明显增加(p0.05)。 2、与阴性对照组比较,1160mg/kg农达剂量组在染毒后早期可引起附睾重量和附睾系数下降,在染毒后晚期引起附睾和睾丸重量减轻,睾丸系数下降(p0.05)。 结论: 农达在60mg/L-180mg/L范围内,能引起GC-1细胞存活率下降,LDH活性增加,MDA生成增多、GSH和SOD活性降低以及DNA损伤,使细胞产生凋亡和坏死,对细胞具有明显的损伤作用;加入抗氧化剂NAC预处理后具有相应的拮抗作用。提示其损伤的作用机制可能与农达导致GC-1细胞氧化与抗氧化失衡、破坏细胞膜通透性,引起细胞氧化损伤和DNA损害等途径有关。 580mg/kg和1160mg/kg的农达剂量组可引起小鼠精子数目减少、精子畸形率增加,以及附睾和睾丸重量及其系数下降,提示农达对雄性小鼠具有明显的生殖毒性作用。
【学位授予单位】:中南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R114

【引证文献】
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