TGF-β1对大鼠脂肪干细胞体外软骨形成能力影响的研究
【摘要】：
目的本文研究大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells ADSCs)在体外分离培养、诱导分化成软骨细胞的能力,初步观察不同浓度的TGF-β1对其增殖、分化成软骨细胞的影响,为软骨组织工程及临床应用提供科学依据。
方法从3周龄SD大鼠腹股沟脂肪垫分离出脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化法分离干细胞,接种于含有胎牛血清的DMEM培养液中分离传代。每日以倒置显微镜观察细胞形态及生长情况。取第三代脂肪干细胞分成5组,包含1个对照组(培养液为人脂肪干细胞完全培养基：高糖DMEM、10%胎牛血清、50nmol/L抗坏血酸、6.25mg/L胰岛素、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、100nmol/L地塞米松,不含TGF-β1)和4个TGF-β1浓度组(浓度分别是1、10、40、80μg/L加人脂肪干细胞完全培养基)。采用MTT比色法进行分化和增殖活性比较,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色和细胞甲苯胺蓝染色检测成软骨细胞分化情况。
结果原代细胞接种4-6小时后即可见沉降贴壁,7-8天左右可见大量增殖,按一定方向性排列呈漩涡状或束状,传代后细胞增殖迅速,生长稳定。成软骨诱导后行细胞甲苯胺蓝染色示：10μg/LTGF-β1浓度组阳性,40μg/LTGF-β1浓度组和80μg/LTGF-β1浓度染色较淡,染色细胞少,0μg/LTGF-β1浓度组和1μg/LTGF-β1浓度组为阴性。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色显示：10μg/L TGF-β1浓度组阳性；40μg/LTGF-β1浓度组和80μg/LTGF-β1浓度组为弱阳性；0μg/LTGF-β1浓度组和1μg/LTGF-β1浓度组为阴性。MTT实验显示10μg/L的TGF-β1可以促进细胞增殖(P0.05)。
结论1.大鼠脂肪干细胞能向成软骨细胞诱导分化；2.10μg/L的TGF-β1是脂肪干细胞增殖、分化成软骨细胞的最佳浓度；3.0、1、40、80μg/L的TGF-β1均不利脂肪干细胞增殖及软骨细胞形成。
【关键词】：脂肪干细胞 TGF-β1 软骨细胞 细胞培养 【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329
【目录】：
- 中文摘要4-5
- 英文摘要5-8
- 缩略语表8-9
- 前言9-10
- 材料和方法10-13
- 1 实验动物10
- 2 主要仪器10
- 3 主要试剂10
- 4 试剂配制10-11
- 5 实验方法11-12
- 6 统计学方法12-13
- 结果13-16
- 1 脂肪干细胞的体外培养和形态学观察13
- 2 脂肪干细胞成软骨细胞诱导后的生长曲线13-14
- 3 细胞增殖活性14
- 4 甲苯胺蓝染色14-15
- 5 Ⅱ型胶原免疫组织化学染色15-16
- 附图16-18
- 讨论18-21
- 1 脂肪干细胞的提取与扩增18-19
- 2 脂肪干细胞体外诱导向软骨细胞分化19
- 3 不同浓度TGF-β1对脂肪干细胞体外增殖、成软骨分化的影响19-21
- 结论21-22
- 参考文献22-25
- 综述25-36
- 致谢36
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