强脉冲光对成纤维细胞分泌TGF-β1的影响及信号通路研究
【摘要】：
目的通过强脉冲光(Intense Pulsed Light, IPL)对成纤维细胞分泌转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)的影响以及信号通路的研究,进一步探讨IPL治疗皮肤光老化的分子生物学机制。
方法分离培养皮肤原代成纤维细胞。将实验分为两组,一组为IPL治疗组,用能量密度分别为0 J/cm2(阴性对照)、10 J/cm2、18 J/cm2、27 J/cm2、36 J/cm2和36 J/cm2x2(36 J/cm2的IPL重复治疗两次)的IPL照射,另一组为IPL+抑制剂组,包括IPL(对照),IPL+SP600125(JNK抑制剂),IPL+SB203580(P38抑制剂),在加入抑制剂处理2h后,均用能量密度为36 J/cm2的IPL照射。采用ELISA法检测两组细胞培养上清液(cultural supernatants, CS)中TGF-β1的浓度,Western印迹法检测IPL治疗组p-JNK(磷酸化的JNK)和p-P38(磷酸化的P38)的表达。
结果
1.两组CS中TGF-β1的浓度
①.IPL治疗组CS中TGF-β1的浓度：IPL治疗组CS中TGF-β1的浓度在10 J/cm2,18 J/cm2,27 J/cm2,36 J/cm2与阴性对照相比均下降(P0.05)，有显著统计学差异,在36 J/cm2与阴性对照相比均下降(P0.05),但无统计学差异,在36 J/cm2x2与阴性对照相比升高(P0.05),有显著统计学差异。
②.IPL+抑制剂组CS中TGF-β1的浓度：IPL+SP600125组TGF-β1的浓度与对照相比下降(P0.05)；IPL+SB203580与对照相比有明显升高(P0.05),均有显著统计学差异。
2.IPL治疗组中p-JNK和p-P38的表达：p-JNK和p-P38信号均先增强后减弱，10J/cm2最强,18J/cm2开始减弱,以后明显减弱。
结论
1.IPL在较低能量密度时抑制皮肤成纤维细胞TGF-β1的分泌,较高能量密度时能促进TGF-β1的分泌。
2.P38、JNK激酶在IPL影响成纤维细胞分泌TGF-β1的过程中起重要作用,IPL可能通过JNK途径上调皮肤成纤维细胞TGF-β1的分泌,通过P38途径下调TGF-β1的分泌。
【关键词】：强脉冲光 成纤维细胞 TGF-β1 JNK P38 【学位授予单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R758.1
【目录】：
- 摘要4-5
- ABSTRACT5-9
- 第一章 前言9-11
- 第二章 材料与方法11-20
- 2.1 研究对象11
- 2.2 仪器设备与试剂11-13
- 2.2.1 主要仪器11-12
- 2.2.2 主要试剂12-13
- 2.3 相关试剂的配置13-14
- 2.4 实验步骤14-19
- 2.4.1 成纤维细胞分离、培养和鉴定14-15
- 2.4.2 四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定IPL亚细胞毒剂量15-16
- 2.4.3 分组处理及IPL能量密度的确定16
- 2.4.4 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TGF-β1分泌水平16-17
- 2.4.5 western印迹法检测IPL治疗组p-P38,p-JNK表达17-19
- 2.5 统计学分析19-20
- 第三章 结果20-25
- 3.1 两组成纤维细胞CS中TGF-β1的浓度20
- 3.1.1 IPL照射后IPL治疗组TGF-β1的浓度20
- 3.1.2 IPL照射后IPL+抑制剂组CS中TGF-β1的浓度20
- 3.2 IPL治疗组中p-JNK和p-P38的表达20-25
- 第四章 讨论25-28
- 第五章 结论28-29
- 参考文献29-32
- 综述32-40
- 致谢40-41
- 攻读学位期间的主要研究成果41
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