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《长沙理工大学》 2009年
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基于有机纳米功能膜的光学生物传感研究

黄茜茜  
【摘要】:近年来,基于金纳米颗粒修饰膜的生物传感器在疾病诊断和治疗、药物开发、蛋白组学和分子生物学领域有着非常重要的意义。 本文采用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作保护剂、柠檬酸钠作还原剂的化学还原法制备了质地均匀、分散性较好的金溶胶。利用自组装方法,将DTT自组装在平板金膜电极(5mm×5mm金电极)表面,比较了L-半胱氨酸与3-巯基丙酸的优缺点,最后键合3-巯基丙酸,形成用于分子识别检测的生物传感膜。采用紫外-可见光谱(UV-Vis)、透射电子显微镜(TEM)对金纳米颗粒进行了表征,并用循环伏安法(CV)对其组装过程进行电化学性能测试。 突破传统EDC+NHS的催化作用,本文采用EDC+DMAP作为氨基与羧基反应的催化剂,获得活性功能增强的有机功能团组装修饰的纳米金膜生物传感器,在可见吸收光谱区展现出灵敏的局域化表面等离子体共振(LSPR)光谱信号。基于新型有机纳米功能膜修饰的LSPR生物传感器对c-myc单克隆抗体的最大吸附量可达到2.4μg/mL。 基于c-myc单克隆抗体固定的LSPR生物传感器可用于致癌基因c-myc重组蛋白的识别,低浓度线性响应范围为6.5×10~(-3)—1.3μg/mL,检测下限为6.5×10~(-3)μg/mL;对0.65μg/mL和0.26μg/mL样品重复测定12次,相对标准偏差分别为1.56%和3.22%,说明该方法重现性好;牛血清白蛋白、猪血红蛋白、牛白蛋白、转铁蛋白、人血红蛋白、凝血酶、溶菌酶等对测定不干扰;与酶联免疫吸附测定法(ELISA)比较,本方法的回收率范围在92.31%—109.23%,说明本方法能用于c-myc重组蛋白的识别检测。相对于传统生物学定性分析方法,该传感器已成功地应用于实际样品肿瘤细胞中c-myc含量的检测,在抗癌预测和治疗方面具有重要应用价值。 基于c-myc重组蛋白固定的LSPR生物传感器可用于致癌基因关联的DNA质粒的检测,其线性响应范围为9.0×10~(-3)—1.5μg/mL,检测下限为9.0×10~(-3)μg/mL,重现性和选择性好,回收率范围在91.11—112.00%,说明本方法能用于DNA质粒的识别检测,在生物医学和分子生物学方面具有重要的研究价值。 基于c-myc单克隆抗体固定的LSPR生物传感器可用于致癌基因c-myc关联的二抗分子的检测,其线性响应范围为4.0×10~(-3)—0.20μg/mL ,检测下限为4.0×10~(-3)μg/mL,重现性和选择性好,回收率范围在91.00—110.00%,说明本方法能用于二抗分子的识别检测,在生物医学和分子生物学方面具有重要的研究价值。
【学位授予单位】:长沙理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:TB383.1

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【参考文献】
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