收藏本站
《湖南农业大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

感染猪的粪肠球菌的分离鉴定及部分特性和诊断方法研究

黎满香  
【摘要】:粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是医院交叉感染的主要病原并具多重耐药性,在人医方面早已引起广泛的关注,然而在动物感染方面研究并不多。本实验对感染猪的粪肠球菌的部分特征及诊断方法做了相关的研究。 1.本研究从2003年到2008年送检湖南农业大学的湖南各地病料中共分离到细菌42株,菌落形态及染色镜检均与粪肠球菌参考株ATCC 29212相似,Lancefield分群显示分离菌以D群为主(41/42),符合粪肠球菌特征,分离菌所检测的生化特性和《常见细菌系统鉴定手册》所记录的粪肠球菌的生化特性也一致。为了进一步确定分离菌属何种菌,采用16S rDNA测序鉴定的方法对分离菌进行鉴定,结果显示42株分离菌与同步测序的ATCC 29212同源性在99.2%到100%之间,与所选择粪肠球菌参考序列的同源性在98.7%到100%之间,NCBI在线BLAST分析发现42株均与Genebank收录的粪肠球菌序列同源性最高,而与其他肠球菌则有多处变异,结合染色形态和生化特征最终将这42株菌株鉴定为粪肠球菌,并将测序结果上传到Genebank。系统进化分析发现湖南分离株16S rDNA序列与E.faecalis参考序列进化关系与地域分布无关,来源于不同宿主的菌株的16S rDNA变异并不大,而与对比的其他四种肠球菌则有多处变异,这些变异区域在这四种肠球菌中却是保守的。 2.16S rDNA测序的方法作为日常鉴定是成本高且耗时长的,为此我们建立了基于粪肠球菌16S rDNA的PCR检测方法,通过比较肠球菌属其他菌的16S rDNA差异设计特异性引物,经PCR检测与16SrDNA测序结果比较、用其他种属细菌阴性对照、扩增片段测序后表明该PCR方法具有很好特异性,最小可检出134 CFU,而且用培养基上的细菌作为模板时不需要特殊处理,操作简易,并可不经细菌培养直接对病料进行检测,适用于日常实验室的检测。 3.42株分离株的8种毒力基因esp、cylA、asa1、ace、efaA、EF0591、EF3314、gelE中EF3314是普遍存在的(检出率100%),efaA也有相当高的检出率(92.86%),这与Creti报道的意大利医院分离株很相似,但ace基因差异很大,在意大利分离株检出率是100%,湖南分离株仅61.90%。湖南省猪源分离株的esp检出率(35.71%)和Creti及Shankar(丹麦)报导的人源分离株相似,Shankar的猪源分离株仅8%(6/75)检出携带esp基因。同样一批菌株在绵羊血琼脂平板上以α-溶血为主导,而在家兔血琼脂平板中以β-溶血为主,并且兔血检出溶血的比例比绵羊血的高,还表现出溶血基因型与溶血表型不一致,‘即cylA+菌株却表现为不溶血,cylA-菌株却表现为溶血。大多菌株(34/42)的明胶分解试验获得与理论预计的一致,即gelE+对应明胶分解(+),gelE-对应明胶不分解(-),然而有4株gelE+菌不能分解明胶的现象,另有4株gelE-菌能分解明胶,出现基因型与表型不一致的情况。此外我们还对引物进行兼并,构建二重PCR,在优化条件后获得良好的扩增效果,提高了检测的效率。 4.对其中的HN45号菌株的生长曲线、半数致死量、在感染动物体内的动态分布及感染动物的组织病理学变化等方面研究时发现,该菌株在TSB培养基的对数生长期在3.5到5.5h左右,之后进入一个缓慢增殖阶段。该菌株对小鼠毒力较弱,半数致死量为5.76×109,这比其它细菌高出一个数量级。然而在腹腔攻毒后1h即可在动物体内心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏中检出该细菌,2h即可在脑中检出细菌,3h即可在尾静脉血液中检出,有较强的组织穿透能力。致死的小鼠心脏、肾脏以及肝脏都有明显眼观病变,如出血、充血现象,微观病变可见肝细胞变性坏死,肺泡膈增生,浆液性渗出,少量炎性细胞浸润等。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R446.5

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 史同瑞,王铭杰,许腊梅,于万才,张维国;兔源肠球菌的分离[J];当代畜牧;1998年05期
2 胡平;施寿荣;王志跃;刘蓓一;杨海明;孔祥玲;;采用变性梯度凝胶电泳技术研究不同形态玉米日粮对鹅肠道微生物区系的影响[J];动物营养学报;2010年01期
3 王亚宾;胡清林;陈丽颖;程金平;陈小丽;崔保安;;一株致仔猪关节炎粪肠球菌的鉴定[J];动物医学进展;2010年S1期
4 李云峰;吴刚;薛芳;宋锋林;蔡鹏;;16S rDNA序列分析法在国际船舶压载舱沉积物病原微生物检测中的应用[J];中国国境卫生检疫杂志;2009年06期
5 李光辉,张婴元;肠球菌感染研究进展[J];国外医学(内科学分册);1999年11期
6 吴高锋;李文刚;高卫科;魏娟;杨慧敏;王鑫;;PCR-DGGE的原理及在动物肠道菌群分析中的应用[J];中国畜牧兽医;2008年06期
7 焦振泉,刘秀梅;16s rRNA序列同源性分析与细菌系统分类鉴定[J];国外医学(卫生学分册);1998年01期
8 刘小琳;刘文君;;生物陶粒与生物活性炭上微生物群落结构的PCR-SSCP技术解析[J];环境科学;2007年04期
9 尹崇,乌尼;鸡源肠球菌的分离与鉴定[J];湖南畜牧兽医;1999年02期
10 邓小玲;柯碧霞;柯昌文;王洪敏;钟豪杰;李灵辉;罗会明;;16S rDNA测序鉴定β溶血性G群链球菌[J];四川大学学报(医学版);2007年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 解永梅;张成玲;赵永强;张薇;张广民;;山东省大白菜黑腐病病原的鉴定及其生物学特性的研究[J];山东农业科学;2007年06期
2 姚良同;丁延芹;刘尧;陈一然;杜秉海;李俊;;玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验[J];山东农业科学;2008年03期
3 朱彭玲;陈强;丁延芹;姚良同;杜志兵;王晶;杜秉海;;新疆地区棉花根际拮抗菌的筛选与鉴定[J];山东农业科学;2008年06期
4 张广志;周红姿;杨合同;赵晓燕;;盐碱土壤中耐盐细菌的分离与鉴定[J];山东农业科学;2008年09期
5 张一;王凤忠;张铭铄;李妍;韩明渠;周波;毛志泉;;苹果园土壤中一株根皮苷降解菌的筛选[J];山东农业科学;2011年12期
6 凌晨;刘波;;2,4,6-三溴苯酚降解菌的筛选[J];安徽化工;2012年03期
7 鲍立宁,洪桂云,黄显怀;电极生物膜脱氮工艺中反硝化菌相分析[J];安徽建筑工业学院学报(自然科学版);2004年05期
8 刘营;李玉保;;鲁西地区奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及药敏试验[J];安徽农学通报;2008年19期
9 曹宁;杨革非;王世彭;刘占云;汤晖;;大庆土壤盐碱菌的分离鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年07期
10 曹红梅;冯杰;沙莎;刘力;;大西洋鲑腐皮病研究——鳃部病原菌的分离鉴定[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年11期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 窦瑞木;雷清泉;张改强;;番茄内生细菌TB-2生化特性及对番茄灰霉病菌的抑制作用[A];经济策论(上)[C];2011年
2 陈如寿;钟佳芳;王艺融;方炎亮;;肠球菌感染的临床分布及耐药性分析[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
3 陈珍;万春和;曾亮明;朱春华;林甦;刘斌琼;林羽;黄瑜;;H9N2亚型禽流感安徽分离株CK/AH/1/10的分子特征[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 毛立;李文良;严少华;钟声;郭俊尧;江杰元;;山羊流产病料中牛病毒性腹泻病毒的检测[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 刘春;;鳢舒伯特气单胞菌内脏类结节病的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 刘洋;布日额;吴金花;郭闯;锡林高娃;刘燕;;内蒙古中东部地区乳源性大肠杆菌PCR检测及其耐药性分析[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
7 马镝;;产壳聚糖酶菌株的筛选、鉴定及抑菌活性研究[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
8 黄华伟;王印庚;陈霞;张凤萍;;渡夏期养殖刺参腐皮综合征的发生与环境因子间的关系[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
9 罗立平;贺建忠;韩博;;奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
10 徐慧;韦莉;佟瑞平;龚玉梅;王宏俊;孙惠玲;张培君;;溶血性曼氏杆菌PCR诊断试剂盒的研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 姚美玲;H9N2亚型禽流感病毒气溶胶发生与传染机制及其感染SPF鸡的特点[D];山东农业大学;2010年
2 张俊忠;东祁连山高寒草地土壤真菌多样性研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 郎亚军;Ectoines高效制备技术及其应用研究[D];大连海事大学;2010年
4 李永芹;养殖鱼类病原菌检测芯片技术的建立[D];中国海洋大学;2010年
5 赵祺;冻土细菌新种和冰缘植物内生细菌新种的特征和多相分类学研究[D];兰州大学;2010年
6 朱兵峰;枯草杆菌两步法生产四甲基吡嗪的调控及机制的研究[D];江南大学;2010年
7 王大红;粘细菌Stigmatella WXNXJ-B产生新型抗肿瘤抗生素的研究[D];江南大学;2010年
8 肖仔君;Acetobacter sp. CCTCC M209061细胞催化潜手性酮不对称还原反应的研究[D];华南理工大学;2010年
9 刘咏梅;产精氨酸脱亚胺酶变形假单胞菌的筛选鉴定及酶的定向改造[D];江南大学;2010年
10 刘君昂;油茶林健康经营关键技术研究[D];中南林业科技大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周晓柳,傅继梁;PCR技术在基因突变研究中的应用[J];癌变.畸变.突变;1990年03期
2 蔡平;基因突变的检测[J];癌变.畸变.突变;1992年04期
3 蒋建文;林文辉;王亚军;石存斌;潘厚军;吴淑勤;;应用DGGE技术比较池塘人工生物膜与水体微生物多样性差异[J];安徽农业科学;2008年21期
4 毕春霞;武静;张德坤;苏维奇;刘成玉;闫志勇;;脑脊液病原菌16S rRNA微型寡核苷酸芯片检测方法的初步研究[J];青岛大学医学院学报;2006年03期
5 李怀;关卫省;欧阳二明;王晓慧;张杰;;DGGE技术及其在环境微生物中的应用[J];环境科学与管理;2008年10期
6 奚敏,邱荆安,姚俐;粪肠球菌致儿童食物中毒的抢救及护理[J];重庆医学;2004年04期
7 史同瑞,王铭杰,许腊梅,于万才,张维国;兔源肠球菌的分离[J];当代畜牧;1998年05期
8 薛建亚;翁心华;朱利平;万谟彬;;细菌16S rRNA基因芯片的构建及其在细菌鉴定中的应用[J];第二军医大学学报;2007年08期
9 刘佩红,王华,沈素芳,王建,沈莉萍,周锦萍;猪链球菌病氢氧化铝二价灭活苗免疫兔血清抗体消长规律[J];动物医学进展;2001年04期
10 汪福顺,刘丛强,梁小兵;湖泊沉积物-水界面铁的微生物地球化学循环及其与微量金属元素的关系[J];地质地球化学;2003年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王颖,陈敏,顾其芳,张美英,周培君;应用脉冲凝胶电泳分析粪肠球菌基因的方法研究[J];上海预防医学杂志;2002年06期
2 李春,张丹,张兰威,于维军;两株降胆固醇球菌生长条件的研究[J];现代食品科技;2005年04期
3 颜艳;徐晨彪;牛卫东;;原子力显微镜观察粪肠球菌的超微结构及生物膜的动态形成过程[J];华西口腔医学杂志;2010年04期
4 张春丽;张宁;;粪肠球菌55株耐药状况分析[J];临床合理用药杂志;2011年15期
5 张丽娟;刘娅力;;耐万古霉素肠球菌的微生物学及流行病学特征[J];国外医学(微生物学分册);1999年06期
6 李萌,王惠云,匡玉莲;肠球菌对临床11种抗生素耐药性调查分析[J];南京医科大学学报;2001年01期
7 王晓东;虞秀飞;朱碧红;卢名芹;陈永平;郑波;欧阳钦;;重型肝炎合并肠球菌败血症患者药敏特点及治疗转归[J];中华内科杂志;2006年11期
8 黄蓉;;如何快速鉴定临床标本中的粪肠球菌和屎肠球菌[J];当代医学;2010年04期
9 许颖;李德超;孙剑;;金银花醇提液对根管粪肠球菌生物膜作用体外研究[J];黑龙江医药科学;2010年06期
10 范鹏;范永震;许颖;吴庆田;杨景云;;水溶性蜂胶对感染根管内粪肠球菌的体外抑菌试验[J];中国微生态学杂志;2011年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 金艳;邹韵秋;郑雨燕;;醋酸氯己定和次氯酸钠对粪肠球菌抑菌作用的体外研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
2 闫培芳;梁景平;;碱性pH对两种生长状态粪肠球菌活性的影响[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
3 郭黎洋;胡涛;;粪肠球菌ATCC19433的蛋白质组学分析[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
4 王亚宾;陈丽颖;胡慧;段志刚;崔保安;;猪源粪肠球菌和屎肠球菌多重PCR快速鉴定方法的建立[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年
5 黄文祥;伍群;吴利先;孙小平;Nallapareddy SR;Murray BE.;;粪肠球菌类毒力基因hyl_1和hyl_2的研究[A];中华医学会全国第九次感染病学学术会议论文汇编[C];2006年
6 罗玉;杨健;;成品次氯酸钠对粪肠球菌抗菌效果的体外研究[A];全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编[C];2011年
7 陈栎江;阮志浩;李超;周铁丽;吴庆;;粪肠球菌ermB基因与转座子Tn1545和Tn917关系的探讨[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年
8 胡庆丰;潘翔军;吕火祥;沈蓓琼;袁武锋;廖维维;;2000~2007年粪肠球菌的临床分离与耐药性变迁[A];2008年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2008年
9 王海洪;;粪肠球菌fabI和fabK基因功能分析[A];首届全国微生物基因组学学术研讨会会程与论文摘要集[C];2006年
10 刘静;李昊;王志娟;何美琳;翟静;;504株肠球菌分布及耐药性监测[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 本文由香港麦迪信医学出版有限公司供稿;游动性DNA——细菌耐药的幕后黑手[N];医药经济报;2003年
2 ;阿莫西林片[N];农村医药报(汉);2007年
3 蔡年生张致平 张月琴 金少鸿 邵荣光;新型合成抗菌药研究进展迅速[N];中国医药报;2007年
4 王秋冬;越打越亲的药物[N];医药经济报;2009年
5 韩咏霞;尿路感染选抗菌素要重视药敏试验[N];大众卫生报;2006年
6 北京大学第一医院 郑波;珍惜糖肽类药物固守抗阳性菌最后防线[N];健康报;2008年
7 记者 周华、张周来;广西马山两镇 农民矿工矽肺病检出率超四成[N];人民日报;2005年
8 高颖 胡光军;江苏疫情检出率连续5年递增[N];国际商报;2006年
9 李西峰 刘炳军 郭悦;业务急剧增长下的高检出率[N];中国国门时报;2007年
10 曾永联;南宁5000对新婚夫妇免费筛查“地贫”[N];广西日报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 黎满香;感染猪的粪肠球菌的分离鉴定及部分特性和诊断方法研究[D];湖南农业大学;2010年
2 王玉宝;肠球菌临床株对氟喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究[D];天津医科大学;2005年
3 吴敏;粪肠球菌和屎肠球菌毒力基因、PAI相关基因及耐药性分析[D];南方医科大学;2008年
4 王亚宾;猪肠球菌病病原分离鉴定及其分子致病机制研究[D];河南农业大学;2009年
5 孙宗科;水中肠道致病菌活的非可培养状态及致病性的研究[D];中国疾病预防控制中心;2009年
6 童忠春;Nisin抗菌肽抑制致龋菌和根管感染致病菌的体外研究[D];第四军医大学;2012年
7 李聪然;新氨基糖苷类抗生素威替米星的药效学研究及其对重组氨基糖苷类双功能修饰酶的稳定性[D];中国协和医科大学;2006年
8 彭鑫;《伤寒论》阳明、太阴病证与肠道微生态及人体反应性关系研究[D];北京中医药大学;2008年
9 董国霞;以PDF为靶点的新药筛选及活性组分的分离纯化、结构鉴定与活性研究[D];中国协和医科大学;2009年
10 崔熠;溃疡性结肠炎患者粪便乳杆菌种的研究[D];中南大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 林荣高;湖南省猪源粪肠球菌基因多样性分析[D];湖南农业大学;2011年
2 王小勤;再治疗根管内粪肠球菌的分离鉴定及其荧光蛋白稳定标记载体的构建[D];第四军医大学;2012年
3 侯璐;猪源粪肠球菌的特性及对仔猪生长性能和免疫力影响的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
4 王珊珊;饥饿期粪肠球菌生物膜的形成及次氯酸钠溶液对其作用研究[D];大连医科大学;2011年
5 孙剑;金银花醇提液对根管内粪肠球菌作用的体外研究[D];佳木斯大学;2010年
6 胡睿;纳米载药微粒对粪肠球菌的体外抗菌研究[D];中南大学;2012年
7 董明;饥饿期粪肠球菌生物膜形成相关毒力因子的表达及两种根管常用药物对其作用研究[D];大连医科大学;2011年
8 易维学;饲用粪肠球菌和枯草芽孢杆菌的体外评价研究[D];华中农业大学;2010年
9 杨平;新型等离子体射流对粪肠球菌的灭菌实验研究[D];华中科技大学;2010年
10 吴海珍;肠球菌心内膜炎抗原efaA在粪肠球菌生物膜形成中的作用[D];福建医科大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026