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《湖南农业大学》 2012年
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醋酸棉酚对小鼠免疫功能及其对腹腔巨噬细胞凋亡的影响

邓思君  
【摘要】:目的:探讨醋酸棉酚对BALB/c小鼠免疫功能的影响和对体外培养腹腔巨噬细胞的毒性作用和诱导凋亡的机制。从而在多方面解释醋酸棉酚对免疫系统的影响,为开发棉酚新的生物学活性和临床用药提供试验和理论基础。 方法:1、5mg/kg,25mg/kg,125mg/kg/d剂量醋酸棉酚连续灌胃4次后,在24h,72h和120h后对正常小鼠的细胞免疫的影响,检测内容包括:免疫器官指数和免疫器官淋巴细胞总量,胸腺,脾脏和淋巴结淋巴细胞亚群分类的影响。相同给药过程对免疫前给药和免疫后给药的免疫小鼠体液免疫的影响,检测内容包括SRBC免疫小鼠溶血空斑数(PFC)与血清溶血素(IgM和IgG)的抗体滴度, 2、以体外培养巨噬细胞系RAW264.7为模型,MTT法检测不同剂量的醋酸棉酚对其增殖的抑制率。攻毒浓度为0,25,30,35μmol/L作用24h后,对细胞SOD和GSH-PX酶活性和MDA含量的影响。通过TUNEL法,AO/EB双染法,和流式细胞术检测醋酸棉酚引起的RAW264.7凋亡。 3、分别用罗丹明123和荧光探针DCFH-DA检测醋酸棉酚线粒体膜电位、活性氧(ROS)、以及自由基清除剂NAC的保护效果。Western blot检测caspase-3和caspase-9蛋白的表达,以及caspase广谱抑制剂和caspase-9的抑制剂(Z-VAD-FMK和Ac-LEHD-FMK)和NAC对醋酸棉酚诱导细胞凋亡的抑制作用。 结果:1、醋酸棉酚降低了胸腺和肠系膜淋巴结的淋巴细胞总数,而且呈剂量相关性的降低了胸腺淋巴细胞中CD4+淋巴细胞百分比,但是增加了脾脏和淋巴结中CD8+淋巴细胞数量。在免疫前给药组中,中高剂量的醋酸棉酚显著降低了PFC数量和IgG量。但是在免疫后给药组中,同时降低了IgM和IgG的量,却对PFC没有显著影响。 2、醋酸棉酚抑制细胞增殖,IC50为32.9μmol/L。降低SOD和GSH-Px的酶活性,MDA含量和显著升高,并呈剂量相关性,剂量依赖性诱导凋亡 3、醋酸棉酚可能通过caspase依赖性的线粒体凋亡途径诱导RAW264.7凋亡。主要表现在:极显著的升高胞内ROS水平,减低线粒体膜电位,激活体caspase-3和-9表达呈剂量依赖性增加。Caspase广谱和caspase-9抑制剂能显著抑制醋酸棉酚诱导的凋亡。NAC的保护作用体现在减少醋酸棉酚诱导的凋亡提高细胞存活率,同时显著降低高剂量醋酸棉酚组细胞内ROS水平升高和阻止线粒体膜电位的降低。 结论:醋酸棉酚有效的抑制体液免疫功能,降低胸腺和淋巴结淋巴细胞总数。但对免疫器官指数影响不明显。其对不同的淋巴细胞亚群可能有着极其复杂和多样化的作用。醋酸棉酚抑制RAW26.47细胞增殖,引起氧化损伤,可能通过caspase依赖性的线粒体途径诱导细胞凋亡
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S858.91

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