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《湖南农业大学》 2013年
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黑丝羽乌骨鸡精液冷冻新技术的研究

邓溯顺  
【摘要】:精液的冷冻是畜禽人工受精和物种基因库保存的基础研究,但目前家禽精液冷冻,依然没有一个合理,有效的冷冻程序,能够使家禽冷冻精液达到稳定的受精率。这也就是为什么家禽冷冻精液没有产业化的主要原因。因此家禽精液的研究有待进一步的研究和开发。 细管精液简易便携式冷冻装置与方法的研究,针对现有细管精液冷冻技术依赖于复杂昂贵的生产设备,以及花样繁多的液氮熏蒸简单方法,尤其是对同批样品不能同时实现不同冷冻速率冷冻等方面的不足。研发了一种用于冷冻精液或细胞的装置和冷冻方法,装置结构简单,能实现标准化、批量制作,尤其是能实现多个样品同时用不同冷冻速率冷冻,成倍提高了冻精研究与小批量生产工作的效率。目前该装置已经获得实用新型专利,该方法申请的发明专利已经进入实质审查阶段。 在黑丝羽乌骨鸡精子冷冻的稀释液,平衡时间和冷冻速率研究方面。利用BPSE、 Lake's和FEB分别作为精液稀释液组,其中BPSE和Lake's组冻后的精子的活力没有显著的差异(P0.05),但与FEB组存在极显著差异(P0.01)。以BPSE作为稀释液在加入冷冻保护剂时,平衡1min,10min,20min,30min和60min,冷冻解冻后精子活力成一个下降的趋势。其中平衡1min和10min精子活力没有差异。在利用BPSE作为稀释液,在加入冷冻保护剂时平衡10min的条件下,解冻后1cm,2cm,3cm和4cm组之间比较,1cm组精子的活力明显的高于其它组(P0.01)。说明黑丝羽乌骨鸡精液的冷冻,以终浓度为6%的DMA为冷冻保护剂,稀释液选择BPSE和Lake’s,平衡选择10min,在本专利装置条件下,离液氮面1cm处冷冻7min,37.8℃水浴解冻,能获得较好的实验效果。 黑丝羽乌骨鸡精液冷冻前后精子损伤检测的研究发现,新鲜精液、冷冻前精液和解冻后的精液,精子DNA的破损率明显增加,分别是6.2%,6.4%和19.8%。DNA受损的精子,产生彗星尾巴宽度和长度的比例,新鲜精液(26.3%)与冷冻精液(30.9%)呈上升趋势,而冷冻前精液(30.1%)与解冻后精液(30.9%)没有很明显的差异。精子膜的破损比例,新鲜精液(2.9%)和冻前精液(5.6%)没有很明显差异,然而冷冻后精液膜的破碎率(63.7%)明显高于前两者。新鲜精液、冻前精液和冷冻后精液的活力分别是52.1%,51.9%和19.8%。本实验说明黑丝羽乌骨鸡的精液冷冻,以精细胞活力、细胞膜完整性和DNA完整性作为损伤评价指标,结果是一致的,此外说明损伤主要发生在冷冻解冻过程,而不是冷冻前过程与冷冻保护剂对精液的毒害作用。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:S831

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【参考文献】
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