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《湖南农业大学》 2015年
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茄子褐纹病菌中dsRNA病毒的研究及其功能分析

张汝佳  
【摘要】:茄子褐纹病是茄子的重大病害,严重影响其产量及品质;真菌病毒在真菌群体中分布广泛,目前已在很多真菌内发现能导致寄主弱毒特性的真菌病毒,利用真菌病毒控制真菌病害具有远大的生物防治前景。鉴定并筛选真菌病毒可以为研究真菌病毒提供丰富生物材料,同时利用弱毒相关真菌病毒将为茄子褐纹病的生物防治提供了一个新思路。本研究以在湖南省分离到的病菌Pv-HN-1为研究材料,对该菌株所含病毒及其与寄主间的相互作用进行了初步的研究,得到的结论如下:1.首次在茄子褐纹病菌中检测到dsRNA病毒。利用纤维素CF-11吸附法进行dsRNA的提取,将取粗提产物进行DNase I(RNase-free)和S1 Nuclease处理,通过1%的琼脂糖凝胶电泳成像,从中提取到三条dsRNA,按分子量大小命名为dsRNA-L(L), dsRNA-M(M)和dsRNA-S(S)。2.对dsRNA-M进行全长cDNA克隆测序和生物信息学分析表明:该病毒全长为5076nt,含有2个不重叠的ORFs,分别与病毒家族(Totiviridae)中病毒的CP和RdRp蛋白具有相似性;通过进化分析,其与稻曲病菌内单分体病毒Ustilaginoidea virens RNA virus 3 (UvRV3)相似性最高。命名为Phomopsis vexans RNA virus 1(PvRV1).(结果已发表在Archives of Virology上),在后续的消除实验和继代培养中,发现dsRNA-M和dsRNA-S,总是一同出现,dsRNA-M和dsRNA-S可能存在一定的关联性或者协同作用。而dsRNA-L是不依赖于M和S存在的一种病毒。(dsRNA-L已完成大部分测序,鉴定为内生病毒)3.通过原生质体再生技术对茄子褐纹病中dsRNA进行病毒消除,并得到了病毒完全消除菌株Pv-HN-1 C-C,只含dsRNA-L的菌株Pv-HN-1 C-L,以及只含dsRNA-S和dsRNA-M的菌株Pv-HN-1 C-MS。对菌落生长速度比较发现:菌株生长速率从大至小依次为:Pv-HN-1 CPv-HN-1 C-MSPv-HN-1 C-L。且致病力产生了差异,菌株Pv-HN-1 C-C发病情况与原始Pv-HN-1出发菌株相比致病性明显增强,而菌株dsRNA-L的致病性相较于Pv-HN-1明显减弱。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S436.411

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