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《湖南农业大学》 2016年
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莲芯粉中甲基莲心碱的酶法提取及抗氧化研究

任美  
【摘要】:莲子钻芯粉作为壳莲深加工时的副产物,是机械钻头从莲子的果蒂到果尖钻孔时形成的粉末。研究表明,具有较强清除自由基、抗氧化作用,对心肌缺血、心律失常和血压上升有较好的治疗效果。本研究以莲子钻芯粉为原料,采用纤维素酶-乙醇辅助提取法对其甲基莲心碱进行提取,并通过测定其对自由基的清除能力和总还原能力,研究了甲基莲心碱的体外抗氧化活性。同时,通过对油脂过氧化值的测定来反映甲基莲心碱对油脂的氧化抑制作用。主要研究成果如下:1、采用高效液相色谱法对莲子钻芯粉中的甲基莲心碱进行检测分析,根据检测结果从线性关系、精密度、重复性、稳定性和加标回收率等方面考察采用RP-HPLC法的可行性,RP-HPLC法色谱条件确定为:采用Agilent TC-C18柱(4.6mm*250mm,5μm)色谱柱,流动相比例为甲醇:0.1%三乙胺水溶液=64:36,该条件下流速和柱温分别为1.0 mL/min和25℃;检测波长为286nm,样本进样量为10μ L。此条件下莲子钻芯粉中的甲基莲心碱的精密度、稳定性、重复性及加标回收率的RSD分别为0.45%、0.73%、0.71%、0.69%,且平均含量为0.415%。2、采用纤维素酶-乙醇对莲子钻芯粉中的甲基莲心碱进行酶解提取,在单因素的基础上,采用Box-Behnken响应面设计对加酶量、酶解温度、酶解时间、酶解pH等工艺参数进行了优选,得到最佳提取工艺条件为:加酶量3.1%(m:m),酶解时间100 min,酶解pH 4.8,酶解温度50℃。酶解后采用乙醇提取,提取条件为料液比1:20的体积分数70%乙醇,于70℃水浴回流提取90min,采用纤维素酶-乙醇提取得到的甲基莲心碱得率为(7.02±0.22)mg/g,高于乙醇提取法(4.03±0.17)mg/g,得率提高了71.9%。采用纤维素酶辅助提取法,操作简单,条件温和,有效地提高了莲子钻芯粉的利用率。3、采用甲基莲心碱标准品进行体外抗氧化试验的研究。研究发现:以VC或TBHQ为阳性对照时,其对·OH、O_2~-·及DPPH自由基均有一定的清除能力,同时具有良好的总还原能力,且皆对浓度呈现一定的剂量效应关系,最大清除率分别达62.79%、76.23%、93.57%。4、采用烘箱法,以油脂过氧化值为检测指标研究甲基莲心碱在主要油脂中的氧化抑制作用。结果表明,甲基莲心碱对菜籽油和猪油具有较强的抗氧化作用,且均随着甲基莲心碱浓度的增加呈现逐渐增强的效果。通过正交试验得出菜籽油和猪油与甲基莲心碱、VC和柠檬酸复配后的配方组合分别为:菜籽油:0.075%甲基莲心碱+0.030%柠檬酸+0.020%VC,猪油:0.020%甲基莲心碱+0.030%VC+0.010%柠檬酸,复配后的抗氧化剂组合能显著延长油脂的氧化诱导期。
【学位授予单位】:湖南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:TQ914.2

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